高效液相色谱法在脱氧核糖核酸酶解动力学研究中的应用.pdf

第７卷第２期 生　物　加　工　过　程 Ｖｏｌ．７Ｎｏ．２ ２００９年３月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｒ．２００９ 高效液相色谱法在脱氧核糖核酸酶解动力学 研究中的应用 林东翔，吴永宏，张业勇，熊　健，柏建新，应汉杰 （南京工业大学制药与生命科学学院，材料化学工程国家重点实验室，南京 ２１０００９） 摘　要：为了更好地对脱氧核糖核酸酶解动力学过程进行研究，建立脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）酶解液中４种脱氧核苷 酸（腺嘌呤脱氧核苷酸（ｄＡＭＰ）、鸟嘌呤脱氧核苷酸（ｄＧＭＰ）、胞嘧啶脱氧核苷酸（ｄＣＭＰ）、胸腺嘧啶脱氧核苷酸 （ｄＴＭＰ））的高效液相测定方法，能将酶解液中４种脱氧核苷酸完全分离并准确定量。在此基础上，对ＤＮＡ酶解的 动力学进行初步研究，其反应机理为不存在底物和产物抑制的双底物顺序反应，动力学方程为ｘ＝１／ｂｌｎ（１＋ａｂｔ） ２ （其中ａ＝０３７２３ －０９７４；ｂ＝－００４９３ ＋１１１５３ －１１１０３），该方程可以很好地描述ＤＮＡ酶解过程，误差 ρ ρ ρ ０ ０ ０ 仅为３３１％。 关键词：脱氧核苷酸；酶解；高效液相色谱；动力学 中图分类号：Ｏ６５２６３；Ｑ５２５　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２００９）０２－００６３－０５ ＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓｉｎｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓｋｉｎｅｔｉｃｓｓｔｕｄｙｏｆＤＮＡ ＬＩＮＤｏｎｇｘｉａｎｇ，ＷＵＹｏｎｇｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＹｅｙｏｎｇ，ＸＩＯＮＧＪｉａｎ，ＢＯＪｉａｎｘｉｎ，ＹＩＮＧＨａｎｊｉｅ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭａｔｅｒｉａｌｓＯｒｉｅｎｔｅｄ ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｆｏｒｆｏｕｒｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｆｒｏｍｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｏｆＤＮＡｂｙＨＰＬＣｗａｓｕｓｅｄｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆＤＮＡ．Ｔｈｅｋｉｎｅｔｉｃｍｏｄｅｌｗｉｔｈｏｕｔｓｕｂｓｔｒａｔｅａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｗｏｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｏｆｏｒｄｅｒｅｄｒｅａｃｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｋｉｎｅｔｉｃｅｑｕａｔｉｏｎｗａｓｘ＝１／ｂ· ２ ｌｎ（１＋ａｂｔ）（ａ＝０３７２３ －０９７４；ｂ＝－００４９３ ＋１１１５３ －１１１０３）．Ｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｖａｌｕｅｓａｒｅｉｎａ ρ ρ ρ ０ ０ ０ ｇｒｅｅｍｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｖａｌｕｅｓ，ａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｖｅｅｒｒｏｒｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｗａｓ３３１％． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ；ｅｎｚｙｍｏｌｙｓｉｓ；ＨＰＬＣ；ｋｉｎｅｔｉｃ ［４］ 　　脱氧核苷酸是构成ＤＮＡ的结构单位，是生命的 法 。由于除了４种脱氧核苷酸之外，酶解过程中还 本源物质。脱氧核苷酸及其衍生物在肝炎、心