马拉色菌对培养人黑素细胞代谢及酪氨酸酶基因表达的影响-皮肤病与性病学专业毕业论文.docxVIP

四川大学临床医学博士专业学位论文A 四川大学临床医学博士专业学位论文 A Absorbance 吸光度值 KC Keratinocyte 角质形成细胞 MC Melanocyte 黑素细胞 DMEM Dulbecco’s modified Eaglel s medium 最低必需培养基 TPA 12-O—tetradecanoyl phorbol一14一acetate 佛波酯 CT Cholera toxin 霍乱毒素 rhEGF Recombinan human epidermal growth factor 重组人表皮生长因子 BPE Bovine pituitary extract 牛垂体提取物 IBMX Isobutyl methylxanthine 3一异丁基一1一甲基黄嘌呤 IL．I Interleukin-l 白介素1 IL．6 Interleukin-6 自介素6 TNF Tumor necrosis factor 肿瘤坏死因子 ET Endothelin 内皮素 DMSO Demethyl sulfoxide 二甲亚砜 lL．1Ra Interleukin一1 receptor antagonist 白细胞介素1受体拮抗剂 EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 四川大学临床医学博士专业学位论文 ELISA R下PCR Enzyme-linked immunosorbnent 出say Reverse-transcription polymerase chain reaction 酶联免疫吸附试验 逆转录聚合酶链反应 cDNA NF-KB Complementary DNA Nuclear factor-lC B 互补 DNA 核因子-KB NO Nitric oxide 一氧化氨 VN Volumel Volume 体积比 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙脂 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 α-MSH Alpha-melanocyte stimulating homone α-黑素细胞剌激素 FGF Fibrlωyte growth factor 成纤维细胞生妖因子 MTT Methylthiazolyl tetrazolium bromide 四甲基偶氨哇蓝 PBS Phosphate balanced solution 磷酸缓冲液 HaCat 角质形成细胞株 四川大学临床医学博士专业学位论文马拉色菌对培养人黑素细胞代谢及 四川大学临床医学博士专业学位论文 马拉色菌对培养人黑素细胞代谢及 酪氨酸酶基因表达的影响 研究生：陈菊萍 导·师：冉玉平教授 摘 要 [目的]：马拉色菌感染所致花斑癣的基本皮肤损害包括色素减退和／或色 素沉着，皮肤色素改变除考虑个体差异性外，是否与不同菌种或菌株的 生物学特性差异有关?本课题将①马拉色菌与角质形成细胞共同培养后 的上清和②马拉色菌分别加入黑素细胞培养体系中，探讨马拉色菌对培 养人黑素细胞酪氨酸酶活性、黑素含量及酪氨酸酶mRNA表达的影响。 [方法]：将人包皮表皮细胞悬液用MCDBl53培养基添加佛波酯 (12一O-tetmdecanoyl phorb01．14．acetate，TPA)、霍乱毒素(Choleratoxin， CT)、重组人表皮细胞生长因子(mcombinan human epidermal growth factor，rhEGF)、3-异丁基．1．甲基黄嘌呤(Isobutyl methylxanthine，IBMX) 等进行黑素细胞纯化培养。用多巴染色、Fontana银染和s一100蛋白免 疫组化染色法鉴定培养的黑素细胞。利用氧化反应原理建立酪氨酸酶活 性检测体系。将7种马拉色菌分别与角质形成细胞株(HaCat)共同培养24 小时后，获得共同培养上清液，按1：l，l：3，1：7(上清体积：黑素 细胞培养液体积)加入黑素细胞培养体系中，24小时后观察黑素细胞增 殖情况(MTT法)、测定酪氨酸酶活性(氧化多巴反应)、黑素含量(NaOH 溶解法)、酪氨酸酶mRNA的表达(实时荧光定量PCR法)以及超微结构 的变化。 C结果]：1．建立了黑素细胞纯化培养体系，能在体外培养及传代5次。 四川大学临床医学博士专业学位论文多巴染色、Fontana银染和S-100蛋白免疫组化染色均证实为黑素细胞。 四川大学临床医学博士专业学位论文 多巴染色、Fontana银染和S-100蛋白免疫组化染色均证实为黑素细胞。 2．酪氨酸酶活性检测体系稳定可靠。最适反应缓冲液为pH 9．0、o．25 mol／L Tris．HCI；底物左旋多巴最大溶解度为