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- 2019-05-08 发布于上海
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学位论文作者签名= 叶吗 指导教师签名= 吟作
日期:ùOl 年 (月即日 日期: vl b 年 f 月l f日
东华大学
叶峰硕士学位论文答辩委员会成员名单
姓名
职称
职务
工作单位
备注
解永树
教授
答辩委员会主席
华东理工大学
鲁希华
教授
答辩委员会委员
东华大学
徐中其
副教授
答辩委员会委员
东华大学
张煊
副教授
答辩委员会委员
东华大学
虞鑫海
副教授
答辩委员会委员
东华大学
沈丽
副教授
答辩委员会委员
东华大学
曾铮
讲师
答辩委员会秘书
东华大学
东华大学硕士研究生学位论文
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毛细管电泳对支链氨基酸分离检测方法的研究及应用
摘 要
支链氨基酸(BCAAs)是一类能够促进人体肌肉合成和缓解疲 劳,提高免疫力的重要氨基酸,是运动营养补剂中关键的功效成份, 定量分析运动营养补剂中以及运动员尿样中 BCAAs 的含量不仅能够 达到对运动营养补剂的质量监控和功效评价的目的,并且还能通过运 动员 BCAAs 摄入量和排泄量的关系来为运动员营养补剂使用方案的 开发提供数据支持。另外,人体尿样中 BCAAs 浓度的升高还是一些 疾病的生物标志(如枫糖尿病)。在众多的氨基酸拆分方法中,毛细 管电泳(CE)技术因其分析速度快、分离能力强、试剂消耗少等优 点而被广大研究者广泛应用。紫外(UV)检测器拥有价格低廉,应 用广泛的优势。本课题旨在开发简便的 BCAAs 的 CE-UV 分析方法 以期应用于上述方面。
第一章中主要介绍了 CE 系统的构造与基本原理,并重点阐述了 BCAAs 补充对运动员的重要作用和过度补充 BCAAs(或蛋白质类运 动营养补剂)对人体的危害以及 BCAAs 需求量和最大可耐受摄入量 的测定方法。提出了 CE 应用于 BCAAs 分析以及运动员营养补剂使 用方案开发的良好前景。
第二章主要对六种背景吸光电解质的紫外吸收性质以及与几种 重要氨基酸的电泳淌度进行了考察与比对,并结合这六种电解质的稳
I
定性,最终选择了适用于 BCAAs 间接紫外检测的背景电解质对氨基
水杨酸(PAS)。通过添加 EDTA,亮氨酸(Leu)和异亮氨酸(Ile) 能够实现部分分离,但 L-Ile 的色谱峰却始终与 Leu 重叠,无法通过 EDTA 的添加实现分离。因此,后续的工作重点在于选择合适的背景 添加剂使 Leu 和 Ile 完全分离。
第三章是 BCAAs 的 CE-间接紫外检测方法的开发。通过对 pH 值、背景添加剂浓度以及背景紫外吸光电解质浓度等影响条件的优化 以及影响机理的讨论,最终确定了最优分离条件为 2.0 mM Na2HPO4, 10.0 mM PAS,40.0 mM β-环糊精(β-CD),pH=12.2。在此条件下, Leu 和 L-Ile 的分离度为 1.0(样品浓度均为 0.5 mM),方法的重现 性良好(峰面积的 RSD 2.1%,n=5),灵敏度虽低于荧光、质谱等 检测器,但本章中 BCAAs 的分析方法可以避免繁杂的柱前衍生过程, 并且价格低廉,可应用范围广。
第四章是基于 BCAAs 在较低的紫外波长下( 220 nm)有一定 的紫外吸收的原理,开发了 BCAAs 低波长直接紫外检测方法,在 40.0 mM 硼砂,40.0 mM β-CD,pH=10.2 的条件下,BCAAs 能够得到完 全分离。方法的背景电解质组成更加简单,同时检测的灵敏度也要高 于文献报道的相似工作。
第五章是间接检测法和直接检测法在运动营养补剂以及运动员 尿液中 BCAAs 分析中的应用。间接检测法获得的补剂中 BCAAs 含 量的数据与文献报道接近,而直接检测法中 L-Ile 峰则受到了干扰。 而运动员尿样中未能检测出 BCAAs,原因一方面可能是灵敏度不足,
II
另一方面可能是因为运动员补充的 BCAAs 未达到可耐受摄入量。本
章最后提出了 BCAAs 萃取的标准方法,有望解决以上所述的问题。
关键词:毛细管电泳;支链氨基酸;营养补剂;紫外检测
III
STUDY ON THE SEPARATION AND DETECTION OF BRANCHED CHAIN AMINO ACIDS BY CAPILLARY ELECTROPHORESIS AND ITS APP
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