氯沙坦和辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏NF-κB、PDGF-B及PKCα表达的影响-病理学及病理生理学专业毕业论文.docxVIP

硕士学位论文氯沙坦和辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏 硕士学位论文 氯沙坦和辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏 NF．K B、PDGF-B及PKC a表达的影响 摘 要 目的近来有文献报道糖尿病时肾脏的细胞因子表达、局 部肾素血管紧张素系统(RAs)及蛋白激酶C(PKC)系统明显异 常。而用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素II受体 l(ATl)拮抗剂甚至用他汀类调脂药均可使糖尿病肾脏的不同指 标获得改善。为进一步研究肾脏局部RAS过度活化、细胞因子异 常及PKC系统在糖尿病肾病发生中的作用及相互之间的联系，以 及氯沙坦、辛伐他汀对糖尿病肾脏保护作用的机制，本研究观察 了链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病Wistar大鼠在糖尿病对照、 糖尿病分别用氯沙坦、辛伐他汀以及用辛伐他汀和氯沙坦联合治 疗的四种条件下肾脏NF—K B、PKC q及PDGF-B表达的情况，通 过与正常对照的比较以阐明NF—K B、PKCⅡ及PDGF-B在糖尿病 大鼠肾脏中的变化和药物作用的可能机制。相同的研究尚未见报 道。 方法 健康成年Wistar大鼠60只，雌雄各半，随机分为 五组：正常对照组8只，糖尿病各组均13只。实验前及实验后 每周监测空腹血糖(FBG)及尿常规尿酮体至少一次。所有糖尿 病组大鼠在空腹10小时后按60mg·kg～，一次性腹腔注射STZ溶 液，正常对照组注射等量的生理盐水，72小时后尾静脉采血，用 血糖仪测FBG。当FBG≥16．65mm01／L并持续3天以上者确认为制 模成功进入实验。实验期间所有大鼠自由饮水进食，糖尿病各组 山西医科大学 山西医科大学 硕士学位论文 不使用胰岛素及其他抗糖尿病药物治疗。氯沙坦治疗组按 20mg·kg～·d1灌胃，辛伐他汀治疗组按2 mg·kg～·d’1灌胃， 辛伐他汀和氯沙坦联合治疗组分别按以上剂量各自灌胃。于成模 后第8周末用代谢笼收集12小时尿液，用放射免疫法测尿白蛋 白并计算12小时尿蛋白排泄率(UAER)，同时测FBG、血胆固醇、 血甘油三酯、血肌酐。之后取肾、组织常规固定、脱水、石蜡包 埋。切片HE染色镜下观察糖尿病肾脏常规病理变化。用SABC免 疫组化方法检测各组肾小球、肾小管NF-K B、PKC a及PDGF—B 三种蛋白的表达情况。用北航图象采集分析软件对免疫组化染色 情况进行定量分析，以阳性染色面积／统计场面积(阳性面密度)、 平均吸光度(阳性单位)及二者乘积为参数通过SAS 6·12软件 对各组均值进行统计学分析。 结果(1)糖尿病8周末，NF—K B、PDGF—B及PKC Q在肾组 织的表达显著增高(与正常对照比P0．05)，。肾小管的胞浆染色 最强，肾小球系膜区的染色也有明显增强。HE染色未见糖尿病肾 病特有的结节型或弥漫型。肾小球硬化表现，但糖尿病对照组可见 明显的。肾小管上皮细胞的空泡样变性，丽正常或药物治疗组未见 相应改变。UAER高达90ug／min以上达到Mogensen临床糖尿病肾 病分期的III期，即糖尿病肾病早期，明显高于正常对照组 (P0．0001)。 (2)辛伐他汀和氯沙坦各自单独治疗均可使以上指标的表达 显著抑制(与糖尿病对照比P0．05)，而且辛伐他汀的治疗作用 独立于其降脂作用，但均达不到正常对照水平，两药联合使用可 使表达水平进一步下降和改善。 (3)辛伐他汀和氯沙坦各自治疗的参数比较发现，氯沙坦 山西医科大学 山西医科大学 硕士学位论文 PDGF-B、PKC Q在肾小管阳性面密度×阳性单位乘积及PDGF—B肾 小管阳性单位的抑制程度上优于辛伐他汀(P0．05)，其余各组 的抑制程度未见统计学差异(P0．05)。 结论1．STZ诱导的Wistar大鼠8周末时，其12小时尿白 蛋白排泄率明显增高。PKC a、PDGF—B及NF—K B均参与了糖尿病 大鼠肾损害的过程。肾小管免疫组化着色最强及HE染色结果提 示对肾小管间质的损伤不容忽视。 2．氯沙坦(20mg／kg·d)的治疗结果提示PKC a、PDGF—B 及NF—K B与肾脏局部RAS过度活化在糖尿病肾病中的密切关系。 通过ATl阻断作用减缓RAS的过度活化，引起PDGF—B及NF—K B 局部表达的减少。PKCQ的下降是由于ATl阻断后G蛋白／酪氨酸 蛋白激酶一磷脂酶C(PLC)／PLD过程中二酰甘油(DAG)生成减 少所致。 3．辛伐他汀可以通过抑制NF—K B、PDGF—B及PKC a在肾脏的 表达起到肾脏保护作用。其中对PKC d活化的抑制可明显减弱对 肾脏局部RAS的激活强度，从而引起NF—K B、及PDGF—B表达的 减弱。而且这些作用不依赖其降血脂作用。 4．氯沙坦和辛伐他汀合用的明显优势提示，两种药物可能 从不同的环节共同作用于细胞因子网络从而起到协同作用，在临 床