慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞生物学特性研究-内科学专业毕业论文.docxVIP

慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞生物学特性研究 慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞生物学特性研究 中文摘要 慢性粒细胞白血病患者骨髓问充质干细胞 生物学特性研究 中文摘要 目的分离、纯化并鉴定慢性粒细胞自血病(chrorLic myelogenous le然emia,CML) 患者骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem ceils，MSC)：研究其增殖、凋亡、致瘤性等 生物学特性；观察其对肿瘤细胞株K562增殖及凋亡的影响。 方法获取并分离CML患者骨髓MSC，低血清培养液培养及传代，获得第三代O3) 至第五代(P5)MSC。光镜观察细胞生长形态，电镜观察细胞超微结构，流式细胞术(nOW cytomelry,FCM)检测免疫表型，油红O染色及Von Kossa染色检测其向脂肪及骨细胞分 化。细胞计数法检测细胞增殖，FCM测定细胞周期及凋亡情况，软琼脂培养法及裸鼠 皮下接种，观察其致瘤性。通过与K562细胞体外共培养及裸鼠皮下共接种，观察其 对K562细胞增殖及凋亡的影响。 结果CML来源的MSC在光镜下观察，呈梭形，并平行排歹lJ成漩涡状生长，电镜 下观察细胞胞质丰富，核质比大，表达CD44、CD73、CD90，不表达CD34、CD45、 HLA．DR。在相应的诱导条件下，其可向脂肪及骨细胞分化，油红O染色及Von Kossa 染色呈阳性。P3代细胞的倍增时阋为(32．614．1．54)h，I4代细胞的倍增时间为 (32，59士1．23)h，Ps代细胞的倍增时间为(32．414-0．75m细胞周期铡定n代G0／GI期细胞 百分比为(93．67％4．1，66％)，S+G2+M期为(6．330／硅1．66％)，未检出凋亡细胞。软琼脂培 养法及裸鼠皮下成瘤试验均为阴性。与单纯IC562细胞悬浮培养比(K562+MSC VS K562)，MSC能促进K562增殖，倍增时间明显缩短([29．5啦O．46]h VS【37．49-a：2．19]h，P 0．05)．细胞周期也有明显变化：G0／GI期细胞减少(06．430／社1．67％]vs [32．230／吐3．350,q，PO，01)，S期纫胞增加(169．634／6：1：3．09。／o]vs[59．370／硅4．408／0)，P O．05)，G2／M期细胞增加(【13．93多钍1．459钉vs[8．40％士1．05％】，P0．01)，细胞凋亡均不 明显。裸鼠皮下共接种试验，K562+MSC组成瘤早于K562组(【12．00士O．82]d vs[15．50土0．58]d，P0．01)，其瘤体容积及瘤体重量也明显大于K562组者：瘤体容积 堡堡丝塑丝鱼垒堕璺童量塑塑垄垦王塑堕竺望兰堑丝里!壅 堡堡丝塑丝鱼垒堕璺童量塑塑垄垦王塑堕竺望兰堑丝里!壅 !茎塑墨 (【75．70-a：7．30]ram2 vS[37．384-2，39]ram2，Po．01)，瘤体重量(【0．64士0．08]g vs 【0．32．土-0．06]g，P0．01)。 结论从CML患者骨髓中可以分离、培养出较纯化的MSC；该细胞群体体外具有 较强的增殖能力及多系分化能力，不具备体内和体外致瘤性；在体外和体内其可促进 K562细胞增殖。 【关键词l慢性粒细胞白血病；问充质干细胞：生物学特性；K562细胞； 作者：陈晓晨 指导老师：吴德沛 Ⅱ 慢性粒细胞白血病患者骨馒闸充质干细胞生物学特性研究 慢性粒细胞白血病患者骨馒闸充质干细胞生物学特性研究 英文摘要 Research on biological characteristics of chronic myelogenous leukemia patients’bone marrow mesenchymal stem ceils Abstract objective To isolate and culture bone marrow mesenchymal stem cells(MSC)from c11romc myelogenous leukemia((CML)patients and examine their functional characteristics；To investigate their biological characteristics like proliferation,apoptosis and tumorigenicity；To observe their effects on proliferation and apoptosis ofK562 c