糜酶对肝星状细胞增殖及转分化的影响-内科学专业毕业论文.docxVIP

本论文已达到医学硕士学位论文要求b 本论文已达到医学硕士学位论文要求 b 答辩委员会主席 乡砌 答辩委员会委员 匀御 ∥■ 答辩委员会委员 延边大学 2016年5月20日 万方数据 学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本入在导师指导下独立完成的研究成果。 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本入在导师指导下独立完成的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的 材料。与我一周工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明 并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名：缉 日期：_二盈冱j三兰—且二山 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可以 借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并授权 其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按保密的 有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1．保密口，在 年解密后适用于本声明；2．不保密囱。 研究生签名：．=圣j霉二导师签名：日期：2巫—生—笠月姐 万方数据 延边大学硕士学位论文 延边大学硕士学位论文 摘要 摘 要 目的运用MTT法、免疫印迹法(Western Blotting)、RT—PCR方法检测糜酶 (Chymase)对肝星状细胞(Hepatic stellate cell，HSC)中a．SMA(a-smooth muscle actin)、TGF(Transforming growth factor，TGF)一Bl蛋白表达量及TGF一13 lmRNA、 Cot—ImRNA的表达。探讨糜酶对肝星状细胞增殖及转分化的影响及在肝纤维发生、 发展中的作用。 方法1．将试验用Wisrar雄性大鼠乙醚麻醉后仰卧固定在手术台上，行“十字” 切口打开腹腔，暴露肝脏、门静脉及腔静脉。2．用灌注液对肝脏进行处理并得到纯 化的HSC，将培养的3—4代细胞用于实验，并分成空白对照组、lng／rnl、10ng／ml、 100ng／ml糜酶组。3，采用MTT比色法检测HSC的增殖并计数OD值。4．Westernblotting 检测蛋白表达并定影。5．应用RT-PCR技术检测HSC上TGF一13 1 mRNA、C01．I mRNA的表达。 结果1糜酶可明显促进HSC增殖，在观察的范围匹t(1ng／ml、tong／ml、100ng／rnl) 呈浓度依赖性，随着糜酶浓度增高，OD值也升高，糜酶浓度最大时可达对照组的 1．45倍(PO．05)； 2．Western Blotting检测结果显示，在糜酶刺激的肝星状细胞中，旺．SMA及 TGF．[31的表达明显增加(P0．05)： 3．RT-PCR法检测HSC上表达TGF．131raRNA及Col—I mRNA的表达明显增强， 在观察范围内，呈剂量依赖性(氏0，05)。 结论1．糜酶显著促进肝星状细胞的增殖，HSC增殖与糜酶浓度呈依赖性。 2t糜酶激活肝星状细胞a-SMA及TGF．131蛋白表达量呈浓度依赖性。 3．糜辙鼢貉陧状绷包TGF一131mRNA及C01．ImRNA表达量与糜酶剂量呈依赖性。 4．肥大细胞糜酶明显激活肝星状细胞，并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。 关键词肝星状细胞：糜酶：Ⅱ一SMA；TGF．13 l；胶原 万方数据 延边大学硕士学位论文 延边大学硕士学位论文 Abstract Abstract Objective：We used the technology ofMTT、Western Blotting、RT-PCR to observe the expression of protein旺一SMA、TGF一131 and TGF-B1 mRNA、Col—I mRNA the HSC by chymase．Investigate the effects of chymase proliferation and transdifferentiation of HSC，and the effects the development of the hepatic fibrosis． Methods：1．The Wistar male rats were anesthetized by the