叶绿体的分离、纯化及荧光观察.docVIP

山东大学实验报告 PAGE \* MERGEFORMAT 4 科目 细胞生物学实验 姓名 *** 系年级 2011级生物基地 学号*** 日期 2013.05.16 同组者 *** 叶绿体的分离、纯化及荧光观察 【实验目的】 1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。? 2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。 【实验原理】 ? 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。通过控制离心力和离心时间等因素，不同的细胞器可以通过阶梯离心的方式得到分离。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部．分批收集即可获得各种亚细胞组分。? 叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。将匀浆液在1000r/min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然后，3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉