枯草杆菌β甘露聚糖酶基因的克隆及表达-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docx

11 11 叫圳聊 中晶称此付钱式嗲 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行 研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论 文不包含任何其他个人或集体巳经发表或撰写的成果作品，也不包含 为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的 材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确 方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名:毛招注 200 年 U 月 F 日 中高称此斜我式等 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门成机构送交论文的复印件成电子版， 允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论 文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 成扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于: 1、 保密口，在年解密后适用本授权书。 2、 不保密口。， 作者签名:脱忽 导附:彻叫 200t 年 12 月 fB J，年 {td 归 III III 独创性说明 期口M本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进 行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容 外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表戒撰写的成果作 品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或 证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贯献的个人和集 体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律 期 口M 关于论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规 定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或 电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可 以将本学位论文的全部戒部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印成扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 日期: IV IV 目录 摘要 ???.???..?.??...?. (VII) Abstract .. ... ( IX) 1 绪育 ? ? ? ...? ? ..? (1) 1.1 ? 一甘露聚糖酶的来源. ? (1) 1.1.2 微生物。叫甘露聚糖酶. (1) 1.1.2 植物。即甘露聚糖酶 .. (2) 1.1.3 动物。-甘露聚糖瞄 (2) 1.2 ? 一甘露聚糖酶的研究进展. (2) 1.2.1 微生物。 甘露聚糖酶的研究进展.. (ω 1.2.2 植物。一甘露聚糖酶的研究进展. (的 1.2.3 动物。-甘露聚糖酶的研究进展. (创 1.3 甘露聚糖酶及其水解产物的应用. (盯 1.3.1 在医药领域中的的应用. (门 1.3.2 在食品工业中的应用. .?? (的 1.3.3 在饲料工业中的的应用. (们 1.3.4 在造纸工业中的应用. ...? (9) 1.3. 5 在石油压裂破胶中的应用，. ..， . .. . . .ω) 1.3. 6 研究展望: (9) 1.4 本研究的目的意义. (9) 1.5 本研究的主要内容和技术路线 (10) 2 ? 甲甘露聚糖酶基因的克隆及分析. ? ?? ? ? (11) 2.1 材料与试剂 (11) 2. 1.1 商株 (11) 2.2 实验方法 (12) 2.2.1 枯草籽菌 A33 商总 DNA 的提取? (12) 2.2.2 简并陀R 扩增。…甘露聚糖酶基囚的中间保守片段. (13) 2.2.3 ? 牛甘露聚糖酶全长基因序列的克隆. (17) 2.3 实验结果与分析 ? (19) 2.3.1 枯草杆菌 A33 菌总 DNA 的提取? (19) 2.3.2 ? 可甘露聚糖酶基因中间保守片段的克隆. ? (19) 2.3.3 ? 町甘露聚糖酶基因全长序列的克降. ? ? ? ? (20) 2.3.4 ? …甘露聚糖酶基因 (manA) 的生物信息学分析 (21) 2.4 讨论?? .. (33) 2.4.1 关于陀R 技术克降目的基囚的探讨 (33) 2.4.2 关于生物馆息学方法的探讨 (35) 3 pRS盯…A manA融合表达载体的构建及其表达与鉴定.. ? (37) 3.1 材料与试剂 (37) 3. 1.1 菌株与质粒 (37) 3. 1.2 工具酶及主要试剂 (38) 3.2 实验方法 (39) 3.2.1 引物设计及目的基因 PCR 扩增 (39) 3.2.2 融合表达载体 pRSET-A-mar 峭的构建 (39) 3.3 结果与分析 (45) 3.3.1 表达就体 pRSET-A 载体的构建及鉴定 (45) 3.3.2 表达载体