麻疹病毒核酸等温扩增试纸条快速检测技术的研究与应用-生物学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY MASTER DISSERTATION Rapid diagnosis of measles virus using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification coupled with a disposable lateral flow dipstick Xu Changping Directed by Prof. Jinagfeng Guo College of Life Sciences, Zhejiang Sci-Tech University Dec, 2015 HANGZHOU, CHINA 分类号： 密级： UDC ： 麻疹病毒核酸等温扩增试纸条快速检测技术的研究与应用 Rapid diagnosis of measles virus using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification coupled with a disposable lateral flow dipstick 论 文 答 辩 日 期 答辩委员会主席 论 文 评 阅 人 答辩委员会成员 课题来源 浙江省医学重点学科群（XKQ-009-003） 浙江理工大学 浙江理工大学硕士学位论文 麻疹病毒核酸等温扩增试纸条快速检测技术的研究与应用 摘 要 麻疹是由麻疹病毒引起的以发热、出疹为特征的急性呼吸道传染病，该病 传染性强，致死率高，是目前导致发展中国家儿童死亡的重要原因。20 世纪 60 年代以来，麻疹疫苗开始广泛使用，使麻疹的发病率、死亡率大幅度降低， 但据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）统计，全球每年仍有 超过 2 千万麻疹病例。WHO 制定的全球控制与消除麻疹计划中，麻疹的实验 室检测是麻疹监测的重要组成部分。 本研究将逆转录环介导等温扩增技术（ Reverse-transcriptase loop-mediated isothermal amplification, RT-LAMP）与带防污染装置的横向流动试纸条检测技 术（lateral flow dipstick, LFD）相结合，建立了一种麻疹病毒核酸快速检测的 新方法。研究针对麻疹病毒血凝素基因设计 6 条 RT-LAMP 扩增引物与 1 条特 异性检测探针，其中上游内引物与探针的 5’端分别标记生物素（biotin）与 异硫氰酸荧光素（ Fluorescein isothiocyanate, FITC ），进行带 biotin 标记的 RT-LAMP 反应,同时进行与 FITC-探针的杂交，最后利用 LFD 对等温扩增产物 完成可视化核酸试纸条检测 。 通过对检测体系的优化，建立的麻疹病毒 RT-LAMP-LFD 快速检测技术能在 1 h 内完成对样本的检测（包括核酸提取）， 方法检测敏感性与荧光 RT-PCR 方法相同，达到 10 个 RNA copies/μL，同时与 其他常见呼吸道传染病病毒无交叉反应，具有良好的检测特异性。 收集494份疑似麻疹患者咽拭子标本，用本研究建立的RT-LAMP-LFD快速 方法进行检测，同时与荧光RT-PCR法进行比较，结果显示两种方法对494份临 床 样本 的检测 结果 无显 著性 差异。 结果 表明 ，本 研究研 发的 麻疹 病毒核酸 RT-LAMP-LFD检测技术对疑似麻疹患者临床样本的检测速度快，而且灵敏度 高、特异性好、操作简单、仪器依赖程度低，有望发展成为麻疹病毒核酸快速 检测的有效手段。 关键词：麻疹病毒; 快速检测; 逆转录环介导等温扩增; 横向流动试纸条 I Abstract Measles is a highly respiratory contagious disease characterised by fever and rash, due to high mobility and mortality, measles is the important reason that resulted in the deaths of children in developing countries. Since the 1960s, mobility and mortality of measles have been further reduced after the implementation of an Expanded Programme on Immunisation, but there are still more than