罗汉果原生质体培养-野生动植物保护与利用专业毕业论文.docxVIP

罗汉果原生质体培养论文作者：莫小强 罗汉果原生质体培养 论文作者：莫小强 指导老师：李伯林 摘要 罗汉果(鲥jtia grosvonorii(Swinglo)C．Jeffrey)是广西重要的经济作物。 罗汉果果实营养价值商，含有丰富的果糖、葡萄糖、蛋白质和多种维生素，其性凉昧甘， 具有清热解毒、止咳润肺等功效．已广泛应用于医药、饮料和调味品中。罗汉果甜甙甜 度高、热量低、无毒，可作为肥胖病人、糖尿病人、高血压病人理想的食品添加剂。目 前罗汉果晶种退化、溜杂严重，需要加强育种研究。原生质体培养育种是改良作物品种 的一条可行途径。迄今为l卜，还没有人开展过罗汉果原生质体培养的研究。我们对多种 材料在不同的酶液浓度卜进行原生质体的游离，以及糖分、激素的种类及浓度对愈伤组 织形成的影响进行探讨。 本文以罗汉果室外栽培叶片、试管无菌苗叫片、以及试管无菌苗茎段为材料，深人 开展了原生质体游离及培养条件的研究。得出如F结果。 罗汉果栽培曲叶片灭菌后剥去下表皮和试管无菌苗茎段切成小段以0．4M甘露醇为酶 液渗透稳定剂的适宜浓度范围。在含2％纤维素酶，0．1％果胶酶以及其它成分的酶液中，在 28士1℃和黑暗条件下，酶解3—4小时；罗汉果试管无菌苗叶片切成2mm长、lmm宽的细条 以0。4M甘露醇为酶液渗透稳定剂的适宜浓度。在含4％纤维素酶，1％果胶酶以及其它成分 的酶液中在28士1℃和黑暗条件下，50rpm振荡酶解6—7hr均能分离出大量有活力的原生质 体。在酶液中添加150mg／L的抗坏血酸可使原生质体的存活率提高12．5％。 实验表明以罗汉果室外栽培叶片为材料的原生质体培养在分裂时间、分裂频率等均 优于以试管无菌苗为材料的原生质体培养。由于罗汉果原生质体对Nm+敏感。以去掉 NH。N0。的MS基本培养基进行原生质体培养。适宜的培养密度为1×105个／mL。在含有2mg／L 2．4-D、5mg／LBA、lmg／LKT}H2％椰汁的培养基中进行培养。采用固一液双层培养在细胞分 裂时间、分裂频率都优于液体浅层培养和璩艏糖包埋培养。栽培叶片叶肉原生质体培养 在2—3天开始第一次分裂，9—10天出现小细胞团，两星期后可形成愈伤组织。 关键词：罗汉果；原生质体培养；愈伤组织 Protoplast Protoplast culture of Siraitia grosvenorii Abstract Thesis author：Me Xiaoqiang Supervisor：Li Bolin Siraitia grosvenorii is an important economic plant grown in Guangxi locally，Its fruit be used Chinese traditional medicine directly．There plentiful fructose，glucose，protein and variety of vitamin in its fruit．The fruit has been used folk medicine for throats，cough，minor stomach and other troubles．Now,it has been used for drinking and condiment．The sweet triterpenoid glycosides in its fruits may serve as a sweet substance for those who suffered from diabetes，adiposity and hypertension．At present，S．grosvenorii varieties are facing problems of degeneration and hybridization and needed improvement．It has been known that cultivating and breeding protoplast is all effective way of improving variety qualities．So far one have studies the culture of the protoplast of S．grosvenorii．We discuss about isolate the protoplast of varied materials in different levels of concentration of ferment and research on the influence of types of sugar and hor