枯草芽孢杆菌戊糖与半纤维素的高效利用及乙偶姻的生产-化学工程与技术专业毕业论文.docxVIP

extracellular cellulase activity was increased by 22%. Secondly, promoters was screened and PcspD was picked for cellulase transcription, which was 58% stronger than the commonly used promoter P43. Thirdly, a mRNA stabilizer was added in front of the RBS region of gene eglS and the extracellular cellulase activity was successfully increased by 35%. Finally, through expression cellulase on a plasmid with higher copy number, B. subtilis could grow with cellulose as the sole carbon source on solid plate. Keywords: Bacillus subtilis, hemicellulose, xylose, acetoin, evolutionary engineering, inverse metabolic engineering 目录 第一章 文献综述1 1.1 木质纤维素1 1.2 半纤维素1 1.2.1 木糖的利用1 1.2.2 阿拉伯糖的利用4 1.3 纤维素5 1.3.1 纤维素的特性5 1.3.2 纤维素酶6 1.3.3 一体化生物加工过程6 1.4 微生物发酵生产乙偶姻7 1.4.1 大肠杆菌发酵生产乙偶姻8 1.4.2 粘质沙雷氏菌发酵生产乙偶姻8 1.4.3 其他微生物发酵生产乙偶姻9 1.4.4 枯草芽孢杆菌发酵生产乙偶姻10 1.4.5 微生物发酵生产乙偶姻的改进方式 11 1.5 进化工程13 1.5.1 提高菌体对环境的适应能力及对有害物质的耐受性13 1.5.2 菌体底物的拓展14 1.5.3 枯草芽孢杆菌的适应性进化14 1.6 选题背景与主要技术路线15 1.6.1 选题背景15 1.6.2 主要研究路线15 第二章 通过反向代谢工程构建高效利用木糖的枯草芽孢杆菌17 2.1 实验材料17 2.1.1 菌株与质粒17 2.1.2 实验仪器19 2.1.3 实验试剂19 2.1.4 培养基20 2.2 实验方法21 HYPERLINK \l _TOC_250012 2.2.1 CaCl2 法大肠杆菌感受态的制备与转化 21 2.2.2 质粒的提取22 HYPERLINK \l _TOC_250011 2.2.3 基因组 DNA 的提取 24 HYPERLINK \l _TOC_250010 2.2.4 DNA 片段的 PCR 扩增 24 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳26 HYPERLINK \l _TOC_250009 2.2.6 DNA 片段的纯化 27 HYPERLINK \l _TOC_250008 2.2.7 DNA 片段的胶回收纯化 27 HYPERLINK \l _TOC_250007 2.2.8 DNA 片段或质粒的酶切 28 HYPERLINK \l _TOC_250006 DNA 片段的酶连 29 HYPERLINK \l _TOC_250005 菌落 PCR 验证质粒 29 2.2.11 枯草芽孢杆菌化学感受态的制备及其转化30 2.2.12 菌体培养与发酵31 2.2.13 枯草芽孢杆菌的好氧及微氧发酵31 2.2.14 发酵底物与产物的检测31 HYPERLINK \l _TOC_250004 2.2.15 RT-qPCR 32 2.3 结果与讨论35 2.3.1 枯草芽孢杆菌对于木糖利用的适应性进化35 HYPERLINK \l _TOC_250003 2.3.2 进化菌株 E72 的全基因组测序分析 36 HYPERLINK \l _TOC_250002 2.3.3 araR 基因突变的影响 38 HYPERLINK \l _TOC_250001 2.3.4 sinR 基因突变效果的鉴定 43 HYPERLINK \l _TOC_250000 2.3.5 comP 基因突变效果的鉴定 52 2.4 本章小结57 第三章 枯草芽孢杆菌利用木糖生产乙偶姻59 3.1 实验材料59 3.1.1 菌株与质粒59 3.1.2 实验仪器59 3.1.3 实验试剂59 3.