棉花GhRGP1,GhRGP2,GhUPTG1和GhUPTG2基因克隆和表达分析-生物化学及分子生物学专业毕业论文.docxVIP

硕士学往论文＼{、STER‘S 硕士学往论文 ＼{、STER‘S rl{E5iS 摘 要 棉花纤维细胞发育过程涉及大量的由单糖聚合成多糖的糖苷转移反应。 在植物体中已发现了大量的糖苷转移酶基因，这与植物体中存在着多种多样的 涉及糖苷转移的生化反应相一致。CesA，Csl，RGP，UPTG等都属于糖菅转 移酶类，在纤维细胞的发育中起重要作用。分离，鉴定这些基因的功能并弄清 楚它们的表达调控，具有重要的意义。GhRGPl，GhRGP2，GhUPTGl，GhUPTG2 基因是本实验室从棉花eDNA文库中筛选出来的，可能与棉纤维发育相关的四 个基因。GhRGPI，GhRGP2含有1080bp读码框(ORF)，编码一个359aa的蛋 白质。GhUPTGl和GhUPTG2分别含有1335bp和1374bp的读码框，编码一 443aa和457aa的蛋白质。本试验从以下三个方面来研究这四个基因。 1．序列分析 序列同源性分析结果表明，GhRGP的氨基酸序列与许多植物RGP蛋白 的同源性在79％以上，如与水稻、小麦、豌豆、豇豆、拟南芥、玉米和马铃薯 的RGP蛋白的同源性分别高达90％、87％、90％、86％、88％、87％和89％， 推测GhRGPl．GhRGP2基因属于RGP蛋白基因。UPTGl基因的氨基酸序列与 己报道的拟南芥，玉米等植物中的UDP一葡糖基转移酶家族氨基酸序列有 30％．43％的同源性， UPTG2基因的氨基酸序列与已报道的UDP一葡糖苷转移 酶家族氨基酸序列有32％一46％的同源性，推测它们可能都属于UDP一葡糖苷转 移酶家族前成员。 2．基因表达分析 提取棉花发育早期各组织的RNA，利用RT．PCR的方法对四个基因的表 达进行分析。GhRGPI基因在四个组织呈低水平表达，子叶中表达量稍高； GhRGP2基因在子叶、下胚轴和根中的表达量较高，在叶中不表达；GhUPTGl 基因在四个组织中都不表达：而GhUPTG2基因只在叶中表达，在其它三个组 织中不表达。本试验初步表明，此四个基因在棉花的不同组织中表达量不同， 硕士学往论文＼{、STFR‘S／-I{ESiS 硕士学往论文 ＼{、STFR‘S／-I{ESiS 呈组织特异性。对其它组织的表达分析和对不同发育阶段各组织的表达分析目 前还在进一步研究中。 3．载体构建与转化。 利用DNA重组技术，将上述四个基因插入到pBll21质粒中，构建了过量 表达载体(overexpression vector)。并进一步构建RNAi载体(suppression vector)。PCR扩增反应及双酶消化证实目的基因已成功插入到载体中。目前 已成功将这些载体转入到Agrobacterium LBA4404中，正在转化烟草及棉花。 本试验为进一步运用转基因技术对棉花纤维素合成相关基因的功能研究打下 基础。 关键词： 棉花；GhRGP；GhUPTG序列分析：组织特异性表达 载体构建； 硕士学往论文＼{、STFR‘S 硕士学往论文 ＼{、STFR‘S El{ESiS Abstract The process of fiber development is involved in a series of reactions of polysaccharide biosynthesis．Many glycosyltransferases genes isolated in plants confo碰a幻ig／yrzasyllransfering reactions．These glycosyltransferases．such as CesA，Csl，RGP，UPTG etc，are important in fiber cells．It iS important to isolate and characterize the functional expression of these genes．We isolated 6hRGPl÷6hRgP2,GhUpTGl．GhUPlG2 genes in previous work。and these genes may related to the growths of cotton fibers．The experiment results aS follows： I．Sequence analysis Databank searches revealed that GhRGP shared more than 79％homology at the amino acid level with the known RGP cDNAs from other plants，such as rice， wheat，pea ，cowpea，