慢性胃炎肝郁证大鼠模型表征与胃黏膜细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的相关研究-中医诊断学专业毕业论文.docxVIP

（二）实验方法 18 （三）统计学方法 20 二、实验结果 21 （一）各组大鼠不同时期体重的变化 21 （二）造模前后大鼠外在表征的变化 21 （三）胃黏膜病理组织学观察 23 （四） 血清 ET 含量 24 （五）血清 NO 含量 25 三、讨论 26 （一）慢性胃炎肝郁证模型大鼠的外在表征 26 （二）慢性胃炎肝郁证模型大鼠胃黏膜病理分析 28 （三）慢性胃炎肝郁证模型大鼠血清 NO、ET 指标的变化规律 28 实验二 慢性胃炎肝郁证模型胃黏膜细胞凋亡及 Bax、Bcl-2 的表达 30 一、材料与方法 30 （一）实验材料 30 （二）实验方法 30 （三）统计学方法 33 二、实验结果 33 （一）胃黏膜细胞凋亡检测 33 （二）胃黏膜细胞 Bcl-2、Bax 蛋白的表达 34 三、讨论 35 （一）细胞凋亡检测方法的评价与选择 35 （二）慢性胃炎肝郁证与细胞凋亡及 Bcl-2、Bax 的关系 36 结 语 39 参考文献 41 综 述 46 附 图 57 致 谢 59 发表论文 60 科研课题 61 查新报告 62 1 1 引 言 《素问·上古天真论》言：“精神内守，病安从来”指出了情志内伤是引发疾病 的重要原因。现代社会人们生活节奏不断加快，精神紧张程度亦随之增高，情志失常 导致的疾病日渐增多。肝失疏泄，肝气郁滞，病及他脏正成为多种疾病主要的发病模 式。慢性胃炎是临床常见的消化系统疾病，属中医学的“胃痞”、“胃脘痛”、“腹胀”、 “嘈杂”等范畴。从当前慢性胃炎发病的因素看，多与七情失和有关，其主要病机多 为情志伤肝，影响脾胃或情志伤肝，饮食伤脾，肝胃失和。 在中医证候动物模型的研究与应用上已经有 40 多年的历史，特别在近十几年来 取得了较快的发展，至今中医动物模型已涉及了八纲辨证、脏腑辨证等 20 余种证型 的研究方法、思路及各种检测指标等，建立了百余种证的动物模型[1]。在中医“证” 模型的基础上结合西医 “病” 的动物模型，可以建立起病证结合的动物模型。其既 有西医疾病的病理特点，又有中医证候的特征，是宏观微观的结合，在证候生物学基 础未阐明的情况下，是较为合适的研究模式[2]，具有非常重要的研究价值。慢性胃炎 及肝郁证动物模型的日趋成熟，为本研究的开展提供了有利条件。在此基础上，综合 病、证两种造模方法，酌加改良，建立起慢性胃炎肝郁证病证结合动物模型，对探讨 慢性胃炎肝郁证的发病机理及诊断指标，解决中医药治疗慢性胃炎所遇到的机理、疗 效等关键问题都具有重要意义。 细胞凋亡(apoptosis)是细胞死亡的一种方式，是在某些生理或病理条件下，细 胞受到某种信号的触发后主动参与并遵循一定程序的死亡过程。正常情况下，细胞凋 亡与增殖一起维持着组织中细胞的动态平衡。胃黏膜上皮细胞的凋亡异常和过度增殖 常可导致胃黏膜病变的发生，而细胞凋亡异常又是重点。整个凋亡过程均由基因调控， 其中促进凋亡基因有 Bax、Fas 基因等，抑制凋亡基因有 Bcl-2 基因等。Bcl-2 基因 家族及其相关蛋白 Bcl-2 是研究最早的与凋亡有关的基因，也是目前最受重视的调控 细胞凋亡的基因家族。Bc1-2 家族基因的作用机制是抑制多种组织的细胞凋亡，Bax 属 Bc1-2 家族基因，但 Bax 基因的作用恰恰与 Bc1-2 基因相反，为促进细胞凋亡的基 因，其表达减弱可能是细胞凋亡受抑制的机制之一。Bax 能够同 Bc1-2 形成异源二聚 体，Bc1-2/Bax 的比值决定细胞受刺激后是凋亡还是存活。故研究 Bc1-2 和 Bax 表达 PAGE PAGE 2 的平衡关系，有助于了解胃黏膜上皮细胞凋亡在胃炎转化过程中的变化规律和调控机 制。 本研究以证候模型为切入点，旨在研究慢性胃炎肝郁证胃黏膜上皮细胞影响的分 子生物学机理，探讨慢性胃炎肝郁证的证候实质及可作为证候辨识的客观指标。近年 来，在慢性胃炎辨证相关研究方面取得了较大的进展，对肝郁在慢性胃炎发病过程中 的意义也越来越重视，但尚未见到从肝郁角度结合病证动物模型进行的实验研究，也 缺乏从宏观表征到微观指标的综合研究。正是基于此，本课题参考以往的研究方法和 成果，针对临床常见病——慢性胃炎，依据“七情失和，肝气郁滞，影响脾胃”的中 医病机理论，以慢性胃炎肝郁证模型大鼠为研究对象，动态观测其外在表征、胃黏膜 细胞凋亡及相关因子 Bcl-2、Bax 蛋白的表达，并结合胃黏膜病理表现及血清一氧化 氮（NO）、内皮素（ET）等指标的变化，从宏观到微观多个层面综合分析慢性胃炎肝 郁证的发病机理，并确定慢性胃炎肝郁证大鼠模型在外在表征、胃黏膜病理及细胞凋 亡等方面的特征性指标，为建立慢性胃炎肝郁证动物模型评价标准，揭示慢性胃炎