酶法制备文蛤活性多肽的研究农产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

学校编码 10390 分类号 TS201.1 学 号 2010228004 密 级 硕 士 学 位 论 文 酶法制备文蛤活性多肽的研究 指 导 教 师： 熊何健 研究员 作 者 姓 名： 白仁奥 申 请 学位级别： 硕士 专 业 名 称： 农产品加工及贮藏工程 论 文 提交日期： 2013 年 5 月 10 日 论 文 答辩日期： 2013 年 6 月 7 日 学 位 授予单位： 集美大学 学 位 授予日期： 年 月 日 答辩委员会主席： 汤凤霞 教授 论 文 评 阅 人： 硕 士 学 位 论 文 酶法制备文蛤活性多肽的研究 Study on the Preparation of Active Peptides from Meretrix Meretrix Linnaeu Protein by Enzymolysis 学 科 门 类： 工学 作 者 姓 名： 白仁奥 指 导 教 师： 熊何健 研究员 专 业 名 称： 农产品加工及贮藏工程 学位授予单位： 集美大学 论文答辩日期： 2013 年 6 月 7 日 学术诚信声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取 得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此 论文产生的权利和责任。 声明人（签名）： 时 间： 保护知识产权声明 本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以 用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 作 者（签名）： 导 师（签名）： 时 间： I I 酶法制备文蛤活性多肽的研究 摘 要 本文以文蛤蛋白为原料，通过蛋白水解制备活性多肽，利用体外实验分别评价了文蛤 多肽的抗氧化活性、ACE（血管紧张素转换酶）抑制活性和抑制肿瘤细胞增殖的活性，并 对相应的活性多肽进行分离纯化和结构鉴定。主要研究结果如下： 以水解度（DH%）为评价指标，通过正交实验，确定复合蛋白酶（Protamex）、中性 蛋白酶（Neutrase）、木瓜蛋白酶（Papain）、碱性蛋白酶（Alcalase2.4L）和风味蛋白酶 （Flavorzyme）五种蛋白酶单酶水解文蛤蛋白的水解条件，复合蛋白酶最适水解条件为： 45 ℃，pH 7.0，酶添加量 3600U/g；中性蛋白酶最适水解条件为： 45 ℃，pH 7.0，酶添加 量 1400U/g；木瓜蛋白酶最适水解条件为：50 ℃，pH 6.5，酶添加量 4000U/g；碱性蛋白酶 最适水解条件为：50 ℃，pH 9.0，酶添加量 2600U/g；风味蛋白酶最适水解条件为：50 ℃， pH 7.5，酶添加量 2000U/g。 测定了五种蛋白酶不同水解时间酶解产物抗氧化活性、ACE 抑制活性、对肿瘤细胞 S-180 和 Bcap-37 增殖的抑制活性。五种蛋白酶水解产物抑制肿瘤细胞增殖方面的作用效 果不明显，但具有较好的抗氧化和 ACE 抑制活性。在抗氧化活性方面，五种蛋白酶水解 产物在浓度为 1mg/mL 时，对 DPPH 自由基的最大清除率分别是：复合蛋白酶为 19.65%； 中性蛋白酶为 20.28%；木瓜蛋白酶为 55.74%；碱性蛋白酶为 25.09%；风味蛋白酶为 21.95%。 在 ACE 抑制方面，五种蛋白酶水解产物在浓度为 2mg/mL 时，对 ACE 的最大抑制率分别 是：复合蛋白酶为 42.33%，中性蛋白酶为 41.8%，木瓜蛋白酶为 50.22%，碱性蛋白酶为 64.01%，风味蛋白酶为 35.92%。 采用切向流超滤法， Sephadex G-25 凝胶柱层析，RP-HPLC 等系列纯化技术对木瓜蛋 白酶酶解产物进行了分离纯化，以产物对 DPPH 自由基清除率为筛选指标，最后得到一个 活性组分，对其结构进行鉴定，得到 4 个目的肽段，其氨基酸序列如下：LNFNLEKSR （1120.3Da）、SWLRPR（814.4Da）、RIGNIISQY（1063.3Da）和 LNFNLEK（877.2Da）。 关键词: 文蛤蛋白，酶解，抗氧化多肽，ACE 抑制多肽，抗肿瘤增殖活性 II II Study on the Preparation of Active Peptides from Meretrix Meretrix Linnaeu Protein by Enzymolysis Abstract In this paper, a