抗菌脂肽固态发酵参数优化及在对虾养殖源头食品安全控制中的应用-食品质量与安全控制专业毕业论文.docxVIP

I I 抗菌脂肽固态发酵参数优化及在对虾养殖源头食品安 全控制中的应用 摘 要 抗菌脂肽是由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)以及纳豆菌(Bacillus natto) 等为代表的芽孢杆菌产生的一系列 脂肽类物质(通常有 surfactin、iturin、fengycin subtilin 和 sublancin 等)，其分子 通常以环脂肽的结构存在。抗菌脂肽具有抗菌和生物表面活性剂特性，在农业 和医药、化妆品及食品、石油开采和环境治理等领域有重要的开发和应用前 景，已引起广泛的关注。 液态发酵是抗菌脂肽目前发酵生产广泛采用的方式，但液态发酵存在诸多 缺点，如发酵对设备的高要求，高成本，低产率，且提取纯化发酵液中的产物 较难；与液态发酵相比固态发酵有很多优势，如发酵基质主要是工农业生产的 的副产物或废弃物，可以降低生产成本；此外，降低了发酵设备要求，发酵效 率和成本都大大降低；而且在生产中还可以避免出现液体发酵过程中难以解决 的泡沫问题，且提取工艺大大简化，成本低廉。然而，关于抗菌脂肽固态发酵 条件控制的研究鲜有报道，而固态发酵条件极大地影响抗菌脂肽的产量，因此 研究固态发酵抗菌脂肽的工艺条件至关重要。此外，目前对抗菌脂肽固态发酵 中的许多关键技术问题和参数还不清楚，更缺乏系统性地描述整个发酵过程中 各个参数值的变化，从而影响了抗菌脂肽的整体发酵效率和发酵的工业化控 制，最终将影响抗菌脂肽高效生产。因而，本研究对抗菌脂肽固体发酵发酵动 力学进行研究，为系统性地描述整个发酵过程中各个参数值的变化，达到对工 业化生产高效控制提供支撑。 近些年来，随着凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖的快发展，导致对 虾养殖体系中水环境的持续恶化，致使对虾的发病率不断增加，目前水产病害 防治的最主要措施之一是饲料中大量添加抗生素。抗生素的大量使用会导致其 在对虾体中的残留量大大增加，不但降低了对虾的抗病能力，形成恶性循环， 最后经直接威胁对虾产品的安全，对人体的健康也将造成巨大危害。同时对虾 原料的带菌率严重，对食品的后续加工安全性造成威胁。因而，源头食品的安 全性成为迫切解决的问题。因此，寻求绿色、环保、高效的添加剂来替代抗生 素成为提高对虾抗病能力和改善对虾产品使用安全性研究的热点。在诸多的抗 生素替代物中，作为一种新型的具有抗菌、免疫调节、促生长、无残留、无抗 II II 药性等特点的添加剂，抗菌肽在家禽、家畜和水产养殖方面均有一定的应用。 然而，由于抗菌肽的成本高、来源有限，通过基因工程获得的抗菌肽活性不高 等问题，因而找出更为合适的抗生素替代物尤为重要。纳豆菌 NT-6 菌株是本课 题组近期分离出的抗菌脂肽高产菌株，通过固体发酵抗菌脂肽产量达到 10 g/(kg·发酵基质)且具有耐热性强、pH 适应范围广、抗菌谱广、溶解性好和安全 无毒等特性，因此将抗菌脂肽作为抗生素的替代品添加到饲料中对提高对虾抗 病能力和食用安全性的研究将有广泛的应用前景。本论文的研究内容和结果如 下： 1. 网袋固态发酵抗菌脂肽参数的优化 通过单因素试验确定的最佳发酵条件为甘蔗渣含量 15%、料水比 5:5、温 度 30℃、发酵时间 48h 和 20 目(Φ10cm×40cm)。在此基础上，初步确定料水 比、温度、接种量为 3 个主要影响因素。然后借助软件 Design Expert 8 进行响 应面实验设计，找出了影响网袋发酵抗菌脂肽产量的各主要影响因数的最佳水 平和它们之间的交互情况，并建立了预测模型方程。响应面实验结果表明，抗 菌脂肽预测值的最大产量 8.74 g/kg 时对应的三个主要因素取值分别为:水料比 1.18、温度 29.78℃、接种量 5.17%。为了测试该模型的精确性，验证实验在最 优条件下进行，抗菌脂肽的产量为 8.77 g/kg，和预测值非常接近。 2. 薄层固态发酵抗菌脂肽参数的优化 以相对湿度、通气量、厚度为 3 个主要影响因素，借助软件 Design Expert 8 进行响应面实验设计，找出了影响薄层发酵抗菌脂肽产量的各主要影响因素 的最佳水平和它们之间的交互情况，并建立了预测模型方程。实验结果表明， 抗菌脂肽预测值的最高产量达到 10.7552 g/kg，三个主因素取值分别为: 相对湿 度 87.68%、通气量 12.48m3/min、厚度 3.11cm。 3. 薄层固态发酵抗菌脂肽的动力学研究 在抗菌脂肽薄层固态发酵过程中，定时测定发酵体系中生物量、抗菌脂肽 的产量和还原糖含量等相关指标，通过 Origin 软件对数据的处理得到相应的发 酵参数和模型方程。得到最佳发酵时间为 48 h，最小生物量 Cx.0= 9.56×