慢性湿疹患者皮损白细胞介素18的表达及意义-皮肤病与性病学专业毕业论文.docxVIP

中山大学硕士学位论文 中山大学硕士学位论文 幔性湿疹患者皮损白细胞介素1 8的表达及意义 IL一18与慢性湿疹的相关性研究。本研究联合测定皮肤和血清中IL一18、IFN—Y 的水平，与正常对照比较，并对其与慢性湿疹患者病情评分的相关性进行研究， 以探讨lL一18在慢性湿疹发病机制中的作用。 研究目的 检测慢性湿疹患者皮损中IL一18mRNA、IFN—Y mRNA水平；血清中IL一18蛋 白、IFN—Y蛋白水平；分析皮损与血清中IL—18的水平与湿疹病情评分的关系， 探讨IL一18在慢性湿疹发病中的作用。 材料和方法 1、研究对象 1．1确定病人入选标准： 1．1．1病程超过6周： 1．1．2病因不明； 1．1．3皮疹以苔藓样变为主，有渗出史： 1．1．4瘙瘁剧烈； 1．1．5对称分布； 1．1．6皮肤组织病理符合慢性湿疹改变； 1．1．7性别不限，年龄16岁至6j岁； ]．1．8两周内未使用过抗组胺药物、类固醇激素及免疫抑制药物； 1．1，9同意进行皮肤病理活检和抽取静脉血进行该试验。 1．2满足以上标准者均可入选病例组，共27例，其中男性12例，女性 15例，最大年龄65岁，最小年龄16岁，平均年龄41±11．9。均为 2005年10月至2006年2月中山大学附属第二医院皮肤科病人。 1．3 正常对照选取整形外科手术之正常皮肤组织和健康体检者血清。皮肤 组织正常对照组I 2例，男性7例，女性5例，最大年龄56岁，最小 年龄24岁，平均年龄36±8．7；血清正常对照组12例，男性6例， 女性6例，最大年龄44岁，最小年龄17岁，平均年龄为31±10．3。 11 中山大学硕士学位论文 中山大学硕士学位论文 慢性湿疹患者歧损白细胞介素I 8的表达及意义 1．4各组间年龄和性别构成比差别无统计学意义，具有可比性。 2、实验方法 2．1收集标本 2．1．1对每例慢性湿疹患者选用典型皮损，按常规皮肤病理活检取 材，切取面积lcmX 0．5em梭形皮损。一部分皮损用于病理活 检，一部分皮损剪除脂肪组织(重50mg左右)，用DEPC灭菌 三蒸水清洗，置于一80C冰箱待检；正常对照选自整形外科切 除的正常皮肤，剪除脂肪组织(重50mg左右)，用DEPC灭菌 三蒸水清洗，置于一80。C冰箱待检。 2．1．2按常规抽取外周静脉血4ml，4C静置lh，4℃，3DOOr／min离 心lOmin，分装入EP管中，置于一80。C冰箱待检。 2．2用1998年Hanifin提出的“湿疹面积及严重度指数”(EczemaArea and Severity Index，EASI)对慢性湿疹患者的临床表现进行病情 评分。 2．3用RT—PCR方法检测皮损中IL一18mRNA、IFN—Y mRNA表达水平 取．80 oc低温保存的皮肤组织标本，在液氮中研磨成粉末，用 Trizol(Invitrogen)常规提取总RNA，取10 p l总RNA，按试剂盒 说明书(Promega)反转录合eDNA，取2 u 1 eDNA加入25p l PCR 反应体系进行扩增。PCR扩增条件为94。C预变性5min；94。C变性 imin，55。C复性30s，72。C延伸lmin，扩增30个循环；72。C延伸10min。 取5 u l PCR产物电泳，用凝胶图像分析软件(UVlgelstartMw)分 析，结果以目的条带与B—actin密度比值表示。 2．4用ELISA方法检测血清中IL一18蛋白、IFN—Y蛋白水平 将．80℃低温保存的血清标本复溶，严格按试剂盒说明书 (IL一18试剂盒为美国RD公司产品，IFN—Y试剂盒为法国DIACLONE 公司产品)进行操作。往己包被了一抗的板条各孔中依次加入二抗 和酶标抗体工作液，并加入底物及终止液，显色后在分光光度计中 492、450hm处读取吸光值。以标准品不同浓度0D值在半对数纸上作 中山大学J4i_E：学位论文 中山大学J4i_E：学位论文 慢性掘疹患者皮损白身·旧邑介素1 8的表达及意义 图，画出标准曲线。根据样品oD值在该曲线图上查出相应人IL—18 和IFN—Y含量。 3、统计方法 结果以y±5表示，采用SPSS 13．0统计软件作独立样本}检验及 Pearson$目关分析。 结果 1、病例组与对照组皮肤组织IL一18r RNA及IFN—Y mRNA表达水平 慢性湿疹患者和正常对照皮肤组织均有IL一18mRNA及IFN—Y mRNA表达， 但在慢性湿疹患者皮损中两者的表达均高于正常对照组，差异具有统计学意 义。具体见表l： 表1皮肤组织IL一1 8mRNA及1FN—YmRNA表达 2、血清IL一18蛋白及IFN—Y蛋白水平 慢性湿疹患者血清IL—18蛋白水平显著高于正常对照组，差异有统计学 意义：IFN—Y