第1章节第2章节-基因工程的基本操作程序-有动画哦资料.pptVIP

四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 * 原核细胞的基因结构(补充内容） 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 ：编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子，下游有终止子 真核细胞的基因结构（补充内容） 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 不编码蛋白质；调控遗传信息的表达,上游有启动子，下游有终止子 非编码序列： 包括非编码区和内含子 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的，先转后翻 编码区是_____的边转录边翻译 不同点 真核细胞 原核细胞 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 目的基因的获取 1 基因表达载体的构建 2 3 将目的基因导入 受体细胞 4 目的基因的检测 与鉴定 一、目的基因的获取 1 目的基因主要是编码蛋白质的基因： 如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相 关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、 与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的 基因、具调控作用的因子等。 2 获取目的基因的常用方法： 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 未知序列 已知序列 （一） 从基因文库中获取目的基因 1. 基因文库的概念: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的 群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。 2. 基因文库的种类: 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 3. 基因文库的目的： 为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因 基因文库的构建 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接导入 基因组文库 cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接导入 cDNA文库 某种生物某个时期的mRNA 基因文库的构建方法 ① 基因组文库的构建 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 重组载体 基因组文库 导入受体菌中储存 ② cDNA文库的构建-----逆转录法： 提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA 单链DNA 双链cDNA片段 重组载体 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 导入受体菌中储存 问题1 对于真核生物为什么用生物发育某个时期的mRNA反转录得的DNA只有这种生物的部分基因？这个部分基因与原基因相同吗？ 某个时期的发育是基因选择性表达的结果，而且与原基因不同，不含非编码区和内含子。 怎样从基因文库中获取我们所需的目的基因呢? 根据目的基因的相关信息：如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA、基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。 问题2 （二）利用PCR技术扩增目的基因 1 概念： PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 3 前提： DNA复制 模板DNA；引物一对；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶 2 原理： 原料： 已知目的基因的一段核苷酸序列 PCR技术的操作过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 d.重复a.b.c步骤：每重复一次，目的基因增加___倍 一 PCR技术扩增过程 变性 退火 延伸 PCR技术扩增与DNA复制的比较 DNA复制 PCR技术 场所 原理 条件 解旋方式 酶 特点 结果 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 四种脱氧核苷酸、模板