血清学试验的教学交流.pptxVIP

血清学诊断 血清学试验的概念 由于抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。 血清学试验的特点 特异性和交叉性 敏感性 可逆性 反应的二阶段性 最适比例与带现象 用已知测未知 特异性和交叉性 特异性 抗原只能与相应抗体结合，而不能与其他抗体相结合。 交叉性 两种不同的抗原之间含有共同的抗原决定簇，则发生交叉反应 。 反应的二阶段性 第二阶段 抗原抗体复合物出现可见反应阶段。此阶段反应慢、需数分钟、数十分钟或更久。 第一阶段 抗原与抗体的特异性结合阶段，此阶段反应快、仅数秒至数分钟，但不出现可见反应。 敏感性 抗原抗体的结合还具有高度敏感性的特点，不仅可检测定性，还可以定量检测微量、极微量的抗原或抗体。 最适比例与带现象 抗原与抗体结合，其比例适当时才可出现肉眼可见反应。抗体除IgM是5价，SIgA 4价外，一般抗体都含有两个结合位点（二价）；抗原则根据分子大小，有10～50个不等的结合点。当抗原抗体比例适当时，两者结合后，尚有未饱和的结合点，可以继续与游离的抗体、抗原或与抗原抗体结合物的未饱和点相联结，逐渐形成愈来愈大的复合物，出现了肉眼可见反应。比例最适合，出现反应最快，反应产物愈多。 如果抗原或抗体过多，抗体和抗原结合点的聚合一开始时即达到饱和，形成小的复合物则不能继续与相邻抗原、抗体结合，不出现可见反应，谓之带现象。 可逆性 抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这种结合是可逆的，结合条件为0℃～40℃、pH4～9。如温度超过60℃或pH降到3以下，或加入解离剂时，则抗原抗体复合物又可重新解离，并且分离后抗原或抗体的性质仍不改变。 用已知测未知 所有的血清学试验都是用已知抗原测定未知抗体，或用已知抗体测定未知抗原。 影响血清学试验的因素 电解质：血清学反应须在适当浓度的电解质参与下，才出现可见反应。0.9%氯化钠溶液。8-10% 温度：在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速抗原抗体结合和反应现象的出现 。 酸碱度：血清学反应通常用pH6～8，过酸或过碱都可使复合物解离，pH值在等电点时，可引起非特异凝集。 振荡：适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体复合物解离。 杂质和异物：试验介质中如有与反应无关的杂质、异物存在时，会抑制反应的进行或引起非特异性反应。 血清学试验的类型 凝集试验 沉淀试验 补体结合试验 中和试验 免疫标记技术 凝集试验的概念 细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，经过一定时间，复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。 凝集试验的类型 直接凝集试验 间接凝集试验 直接凝集试验 概念：颗粒性抗原与相应抗体在电解质的参与下，直接结合，凝集成团的现象，称直接凝集试验。 类型：按其操作方法可分为玻片法和试管法。 1．玻片凝集试验 方法：在玻璃板或瓷片上进行。 特点：简单、快速。 用途：定性试验，如细菌鉴定、血型鉴定等。 2．试管凝集试验 方法：在试管中进行。 特点：准确、耗时。 用途：定量试验，如诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价。 结果判定 结果用“+”表示反应强度。 ++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底。 +++ ：液体透明，菌体基本被凝集沉于管底。 ++ ：液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀。 + ：液体透明度不明显或不透明，有不明显的沉淀或有沉淀的痕迹。 — ：液体不透明，呈均匀混浊，管底无凝集。有时有少量菌体集中于管底中心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。 以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集价判为可疑。 如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。 间接凝集试验 概念： 将可溶性抗原或抗体与载体连接后，再与相应的抗体或抗原作用，所出现的特异性凝集反应为间接凝集试验。 类型： 间接血凝试验 乳胶凝集试验 协同凝集试验 致敏红细胞 间接血凝试验原理 凝集强度判定 ＋ （100%红细胞凝集）：边缘不整齐，有红色颗粒布满孔底） ± （50%红细胞凝集）V型孔：孔底可见红色颗粒，中央有少量红细胞沉淀 － 红细胞呈点状沉于孔底，无红色颗粒。 能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，为该病毒的红细胞凝集滴度，即一个凝集单位。如表18-1-1的病毒血凝滴度为27，即将病毒原