慢性髓细胞白血病患者的细胞遗传学与分子生物学检测-血液内科专业毕业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 中文摘要 第一部分 76 例慢性髓细胞白血病患者细胞遗传学分析 目的：观察利用甲磺酸伊马替尼（Imatinib meslate, IM）治疗的 76 例慢性髓细胞白血 病患者(CML)不同病期染色体克隆演变特点。 方法：对我院 76 例应用 IM 治疗的 CML 患者的染色体核型进行回顾性分析，染色体 的检测采用 G 显带技术。 结果： IM 治疗前 CML 患者的核型除了典型 Ph 易位，还有变异 Ph 易位、Ph+附加 异常(Ph+ clones with additional chromosomal aberrations，Ph+ACA)、Ph-附加异常(Ph- clones with additional chromosomal aberrations，Ph-ACA)。少数 IM 治疗前未检出 ACA 的患者在治疗后可检测出 Ph+ACA 或 Ph-ACA。伴有 ACA 的 CML 患者 IM 治疗后仍 有可能获得完全细胞遗传学缓解(CCyR)。 结论：CML 患者在 IM 治疗前后核型均有可能伴有 ACA，但是治疗后 ACA 克隆比例 可以下降甚至完全消失，获得 CCyR。 关键词：白血病，髓样，慢性；费城染色体；甲磺酸伊马替尼，核型分析。 第二部分 慢性髓细胞白血病患者 ABL 激酶区点突变的检测 及其临床意义 目的：探讨慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者中，Abl 激酶区点 突变发生的的百分比、点突变的种类以及它们对于 CML 患者的临床意义。 方法：（1）收集 58 例 CML 患者外周血或骨髓标本，其中包括慢性期(chronic phase， CP) 48 例（初治 22 例，复治 26 例）、加速期(accelerated phase，AP) 6 例和急变期(blast crisis，BC)4 例；（2）将所收集到的外周血或骨髓标本用淋巴细胞分离液（Ficoll）分 离单个核细胞，然后用 Trizol 试剂抽提单个核细胞中的总 RNA；（3）合成 cDNA；（4） 以巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）方法扩增 58 例 CML 患者标 本 ,扩增得到 BCR /ABL 融合 mRNA 的 ABL 激酶区的相互重叠的两段扩增片 段:ABL-B (393 bp,相应于 206～335 氨基酸)和 ABL-C (482 bp,相应于 262～421 氨基 酸 )；（5）将所获得的巢式 PCR 产物全部进行回收纯化以及双向测序，将测序结果与 NCBI 基因资料库比对，分析序列同源性，确定突变碱基的具体位点，判断其相对应 的氨基酸。 结果：在 58 例 CML 患者中检出 11 例伴 Abl 激酶区域点突变，占 19.3%的比例，其 中 CP8 例（初治 3 例，复治 5 例），AP2 例，BC1 例，点突变类型包括： T212A、 K219E、I242V、G250E 、E255K、M278V、E282V、 K291E、 H295R、T315I 、L323P、 A344V、N358S、I347V、D363T，依据 CML 患者的临床分期，CP、AP、BC 患者 Abl 激酶区域点突变的发生率分别为 16.7%、33.3%、25%。 结论：（1）CML 患者对伊马替尼（imatinib，IM）耐药的重要原因之一是 Abl 激酶区 域点突变；（2）不同种类的点突变可导致不同程度的耐药；（3）突变可发生于部分初 治慢性髓细胞白血病患者;(4)少数 CML 患者可以同时检测到两种以上的点突变。 【关键词】慢性髓细胞白血病；IM 耐药；Abl 激酶区点突变；BCR-ABL 融合基因 Abstract PART ONE Cytogenetic analysis of 76 cases with chronic myeloid leukemia Objective: To investigate clonal evolution of in chronic myeloid leukemia(CML) treated with IM． Methods: A total of 76 CML patients were retrospectively studied ． Chromosome preparation of bone marrow cells was made using direct and short-term culture. Karyotype was analyzed by G-banding． R