《马立克病的实验室诊断(琼扩试验)》-公开·课件.pptVIP

技能训练9 马立克病的实验室诊断（琼扩试验） 掌握鸡马立克病的实验室诊断方法 10×100mm试管若干只、玻璃棒（直径6～8mm、圆头长约16cm）4～6只。胶头吸管18～20只、烧杯或搪瓷缸4～6个，玻璃平皿、精制琼脂粉、打孔器（直径3mm和6mm）、8%pH7.2～7.4的钠、钾磷酸盐缓冲液、标准抗原、阳性血清等 方法步骤 （一）1%琼脂平板制备 （二）加样 （三）反应 （四）结果分析 （一）1%琼脂平板制备 制板： 用8～10%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液，电炉加热使充分溶化后，倒入直径90 mm培养皿，制成厚度为2.5～3mm琼脂平板；平置，在室温下冷却凝固后打孔。 打孔： 在琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径5mm，孔距2～5mm，将孔内的琼脂用针头斜面向上轻轻将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。 封底： 用酒精灯轻烤平皿底部至微烫，封闭孔底部，以防侧漏。 编号：将周边孔编号1～6 （二）加样 1．检测羽髓中马立克病病毒抗原（MDV抗原） 向中央孔加MD阳性血清 向周边1、4孔加标准MD琼扩抗原 向周边2、3、5、6孔加待检羽髓浸提液，选拔受检鸡含羽髓丰满的羽毛数根（幼鸡8根以上，成鸡3～5根），将带有羽髓的毛根剪集于试管内，每管滴加2～3滴生理盐水，用玻璃棒将羽毛根压集于管底，以适当的压力转动玻棒10多次，待浸提液充分浑浊后，倾斜试管，以玻棒引流将浸提液导至管口，另一人用吸管将之移加入该孔内。 2．检测血清抗体（被检鸡血清） 向中央孔滴加标准琼扩抗原 向周边孔滴加待检血清和有一孔加阳性血清 均以加满而不溢出为度 （三）反应 将加样后的琼脂平皿加盖后倒置平放于加盖的湿盒内，置37℃温箱中孵育，8～24h内观察并记录结果。 （四）结果分析 被检样品孔与中心孔之间形成清晰的沉淀线，并与周边已知抗原和阳性血清孔的沉淀线互相融合者，判为阳性 不出现沉淀线的判为阴性； 已知抗原与阳性血清之间所产生的沉淀线末端变向被检样品孔内侧时，则该被检样品判为弱阳性。 有的被检材料可能会出现两条以上沉淀线，其中一条与已知抗原——阳性血清的沉淀性融合者，仍判为阳性。 （五）注意事项 上述方法可用于20日龄以上鸡羽髓MDV抗原检测和1月龄以上鸡的血清抗体检测 课后作业 1.写出实习报告； 2.掌握鸡马立克病的实验室诊断方法 * * 实训目标 仪器材料