绵羊肺炎支原体的分离鉴定及全基因组序列的测定和分析预防兽医学专业毕业论文.docxVIP

目 录 1 引言 1 1.1 绵羊传染性胸膜肺炎的研究进展 1 1.1.1 绵羊肺炎支原体的特性 2 1.1.2 流行病学 2 1.1.3 MO 的致病机理 3 1.1.4 临床症状 3 1.1.5 病理变化 3 1.2 病料的采样和处理 4 1.3 病原分离与培养 4 1.4 病原的鉴定 4 1.4.1 形态学鉴定 4 1.4.2 生化鉴定 5 1.4.3 血清学鉴定 5 1.4.4 生长抑制试验 5 1.4.5 PCR 鉴定 5 1.5 诊断 6 1.6 防治措施 6 1.7 免疫学研究进展 7 1.8 本研究的目的和意义 8 2 MO 的分离培养与鉴定 9 2.1 实验材料 9 2.2 试验方法 9 2.2.1 病料的采集 9 2.2.2 分离与培养 9 2.2.3 病原的鉴定 10 2.2.4 生长抑制试验 11 2.2.5 PCR 鉴定 11 2.2.6 培养基的筛选 12 2.2.7 敏感药物的筛选 13 2.2.8 保存与复苏 13 2.3 实验结果 14 2.3.1 临床症状与病变 14 2.3.2 分离培养结果 15 2.3.3 鉴定结果 16 2.3.4 培养基筛选结果 18 2.3.5 保存与复苏 20 2.4 讨论 21 3 MO 基因组序列的测定和分析 22 3.1 XJ 全基因组的测定 22 3.2 基因组组装结果评价 23 3.2.1 基因组覆盖度分析 23 3.2.2 基因区覆盖度分析 23 3.3 基因预测 23 3.4 ncRNA 预测 23 3.5 基因功能注释 24 3.6 结果 24 3.6.1 XJ 全基因组参数 24 3.6.2 基因组覆盖度 25 3.6.3 基因预测结果 26 3.6.4 重组序列分析结果 26 3.6.5 ncRNA 的预测结果 27 3.6.6 基因功能注释结果 28 4 讨论 28 5 全文结论 29 致 谢 28 参 考 文 献 31 附 录 34 作 者 简 介 36 内蒙古农 内蒙古农业大学硕士学位论文 PAGE 11 PAGE 10 PAGE 10 绵羊肺炎支原体的分离鉴定和全基因组序列的测定和分析 1 引言 1.1 绵羊传染性胸膜肺炎的研究进展 绵羊传染性胸膜肺炎（contagious ovine pleuropneumonia）是由绵羊肺炎支原体 （Mycoplasma ovipneumoniae，MO）引起的一种高度接触性传染病，是由 Mackay 等于 1963 年在英格兰是首次从绵羊体内分离到的，Carmichael 等正式的将其命名为 MO[1]。它是一种能够引起绵羊和山羊都患传染性胸膜肺炎的疾病，是以咳嗽、气喘、 发烧、渐进性消瘦及肺的间质增生性炎症为特征的呼吸道疾病。此病的 发病率 20%~30%，有个别地区的可高达 60%~80%，死亡率是在 15%~30%左右。MO 结构 复杂、培养困难，目前仍缺乏有效的生前诊断和防治措施，是给养羊业带来巨大危 害的一种疾病。患此病的羊只在临床上的表现主要是咳嗽、流鼻涕、消瘦、贫血、 生长发育迟缓等，患该病的羊只病程可达数月至数年，并可造成出栏率、毛质和毛 量的下降以及饲料和人力大量的浪费。同时患该病的羊只由于免疫力的下降还能诱 发其他病原（如巴氏杆菌、3 型副流感病毒和精氨酸支原体等）的继发或混合感染， 造成死亡率上升，给养羊业带来重大的经济损失。虽然绵羊支原体肺炎的感染范围 和严重程度是低于山羊传染性胸膜肺炎的，且不是致死性的，但此病的分布范围是 非常广的，几乎遍布世界上所有的养羊国家和地区，尤其是在养羊业占畜牧业的比 重较大的中东、西亚和非洲等不发达的国家较为常见，而且此病在全世界有蔓延的 趋势，给养羊业造成了巨大的经济损失，所以对引发该疾病的病原体 MO 的研究日 益受到人们的重视。目前，新西兰、匈牙利、冰岛、英国、澳大利亚、西班牙、土 耳其、非洲及西亚的许多的国家都相继报道有由 MO 所引起绵羊和山羊胸膜肺炎的 发生[2]。在我国，胡景韶等和谢守栋等先后报道从四川和宁夏患肺炎的绵羊肺中分 离到 MO，并确定是引起当地的绵羊增生性间质性肺炎的病因。随后，邓光明等和 王栋等分别从甘肃、辽宁和河北等地患肺炎或胸膜肺炎山羊的病例中分离到 MO， 并证明了其对山羊的致病性[3]。近年来，随着养羊业在我国的发展，由 MO 引起的 疾病先后在甘肃、宁夏、江苏、云南、四川、辽