门冬胰岛素结晶工艺的研究-免疫学专业毕业论文.docxVIP

研究 研究生蒋振东 遵义医学院硕士学位论文 万方数据 万方数据 目的： 门冬胰岛素结晶工艺的研究 中文摘要 ①对门冬胰岛素原料药生产过程中的蛋白结晶工艺进行研究，确定结晶的制备工 艺，为生产提供成熟稳定的工艺路线。 ②使门冬胰岛素成品以晶体的形式保存和运输，降低门冬胰岛素原料在储运过程 中质量变化的风险，提高产品的稳定性，减少生产过程中的损失，为制剂提供稳 定的原料药产品，保证为患者提供安全，有效的产品。 方法： ①蛋白结晶：室温（23℃）下，用注射用水配制含 3.0～10.0 g/L 门冬胰岛素的 结晶液，加入结晶物质，使其含 0.2～1.5 M 甘氨酸、体积分数为 10～30%的有 机溶剂、体积分数为 0.2～0.4%的酚类物质和 0.2～0.5 M 盐类物质，调节结晶液 pH6.0～6.5，加入锌离子（锌离子与门冬胰岛素的摩尔比），室温下结晶 3～6 小时后降温至 2～8℃，静置 12～18 h 后析出蛋白晶体。 ②晶体与结晶液固液分离及洗涤：结晶后抽去结晶体系上清母液，加入等体积 20%乙醇搅拌洗涤，静置一定时间后，抽去或倾倒出上清液，重复以上操作 2-4 次，最后将晶体冻干成粉末。 ③按照药典稳定性试验标准对结晶粉进行影响因素试验和加速试验。 ④参照中国药典 2010 年版二部附录Ⅶ G 胰岛素生物测定法对门冬胰岛素进行生 物活性测定。 结果： ①通过上述实验摸索出了一套门冬胰岛素原料药的结晶工艺条件参数，并成功得 到蛋白晶体。 ②通过显微镜观察，可见晶型均一性好，形状规则的晶体。通过超高效液相色谱 仪（HPLC）检测，稳定性试验各项结果符合药典标准。 ③门冬胰岛素生物活性为 25 单位/mg，符合中国药典规定的每 1 mg 的效价不得 少于 15 单位/mg。 结论： 2 门冬胰岛素原料药的结晶工艺符合生产要求，本工艺减少原料药生产过程中的损 失，提高蛋白的稳定性，推进门冬胰岛素原料药结晶的研究进展。 关键词： 糖尿病 门冬胰岛素 结晶 稳定性研究 3 Study on the crystallization process of recombinant insulin aspart Abstract Objective: ①Study on the parameters of recombinant insulin aspart crystallization process and provide a set of optimized crystallization process for industrial production; ②Recombinant insulin aspart was saved and transpoted as the crystallization fo rm, the stabilization of recombinant Insulin aspart can be improved. Methods: ① Crystallization process of protein: The reaction system: recombinant Insulin aspart 3.0～10.0 g/L, Glycine 0.2～1.5 M, Organic solvent 10～30% (v/v), Phenols 0.2～0.4%, salts 0.2～0.5 M, pH 6.0～6.5, Join Zn2+. The reaction was carried on at the room temperature for 3~6 h and then let stand for 12~18 h at 2~8℃. ② Separation of Crystal:Remove the supernant after crystallization, and then ad d the Equal volume of 20% Ethanol solution to wash the crystal and repea ted 2~4 times, then freeze-drying. ③ Study the Influencing factors test and short-time test of the Insulin aspart c rystal according to the Chinese Pharmacopoeia. ④ Study the bioactivity of recombinant insulin aspart according to the Chinese Pharmac