扩展细胞色素P4502A6对大位阻底物的适应性.PDF

2009 15 1 ): 059~063 2009-02-25 应用与环境生物学报 ， ( Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2009.00059 扩展细胞色素P450 2A6对大位阻底物的适应性* 1, 2 2 2 1 1** 2** 唐德芳 张志刚 裴小琼 袁 帅 胡 承 吴中柳 1 ( 四川大学生命科学院生物资源与生态环境教育部重点实验室 成都 610041) 2 ( 中国科学院成都生物研究所 成都 610041) 摘 要 细胞色素P450酶 (P450)的分子改造及其催化的生物转化是当前的两个研究热点. 本研究以扩展 P450 2A6的底 物适应性为目标，通过尝试对P450 2A6酶进行N-端修饰提高表达量、筛选随机突变库以及点突变改变活性位点重要 氨基酸残基等手段，在两个随机突变体中未筛选到功能突变体，但通过点突变重要氨基酸残基获得了新的突变体 P450 2A6 (N297Q/I300A). 该突变体具有比野生型和已报道的其它突变体更广泛的底物适应性，能够催化氧化大位阻 底物 6-苄氧基吲哚 (6-OBzl-indole)生成蓝绿色物质. 该物质经质谱测定为靛蓝类二聚体化合物. 实验表明，其中两个氨 基酸残基的变化都是关键突变，此结果与最新的P450 2A6突变体晶体结构研究相符. 计算机模拟显示，I300A突变导 致活性口袋在铁卟啉环的垂直和水平方向都增大，使其能接纳在两个方向都有位阻的底物；而 297位的天冬酰胺是一 个功能保守的残基，N297Q的变化可能与氢键等弱作用有关. 图4 表 1 参 29 关键词 细胞色素P450 2A6 ；CYP2A6；点突变；生物转化；6-苄氧基吲哚 CLC Q73 : Q939.93 Expanding the Substrate Spectrum of Cytochrome P450 2A6 * towards Bulky Substrates 1, 2 2 2 1 1** 2** TANG Defang , ZHANG Zhigang , PEI Xiaoqiong , YUAN Shuai , HU Cheng WU Zhongliu 1 ( MOE Laboratory of Bioresource and Environment, College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610041, China)