麻疯树的高效再生和基因转化研究-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

Ijllijlll III IIIII1IIIIIIIIIIIIIIIII1 Y184S32O 申奇休止科教式嗲 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立 进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用 的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体巳经发表或 撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其 他教育机构的学位成证书所使用过的材料。对本文的研究 作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式表 明。本人完全意识到本声明的法律后果由本产承吨， 作者签名兵们的 A 叫年 t? b月 f/ 日 中高称t.斜线式嗲 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的 规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的 复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南 林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制 手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于: 1、 保密口，在年解密后适用本授权书。 2、 不保密因。 〈请您在以上相应方框打 4;J) 作者签名:户Iv ?J ; A 年 u (， \ I 日 刊句:例句 ì 年 b 月( I 日 硕 1: 硕 1:学位论文 麻风树的 ltj放 Ilt生和占在同转化研究 摘要 麻疯树是…种重要的能源植物，但是麻疯树种植区域狭窄，产量低限制了其 作为能源植物进行大规模栽培和产业化。跑过基因工程的方法可以改良麻疯树的 抗性、产景、油质等性状，从而扩大麻疯树分1t范围，增加结实产量、增加麻疯 树种子含油量、改良油质。而麻疯树的遗传改良需要建立高效再生(主要是叶盘 再生)体系和转化体系。本研究建立了麻疯树叶盘高效再生体系，初步研究了农 杆菌介导的麻疯树叶盘转化。 本研究直接以温室中培养的一年生麻疯树为材料，通过增加 BA 和 IBA 的 浓度以及调整两者比值，采用长时间暗培养的方法筛选出最佳不起芽诱导激素浓 度为 5mgLBA ，0.5mgL.1IBAo 进一步研究了赤莓素对不定芽再生的影响，当 赤霉素浓度为 0.05 mgL-l ，麻疯树叶盘再生频率达到90.9%，比现有文献报道的 先进水平(约 56%) 提高 34.9% ，平均不定芽个数达到4.6 个。经过上述改进， 提高了麻疯树植株的再生频率，从而建立了以麻疯树叶盘为外植体的高效的间接 再生体系. 虽然叶盘问接再生能取得较高的再生频率，但直接分化再生相对于间接再生 周期短，操作简单，未经过脱分化而能保持遗传稳定性，转化外源基因也能稳定 遗传。本研究继续以温室中一年生麻疯树为材料，采用正交实验的方法得出不定 穿再生的最佳激素组合为 1 mgL ITDZ，0.5 mgLIBA ，1.5 mgL1日A; 测定了 不定芽再生的硝普纳 (SNP) 效应，在 SNP 为 2mglL 时能显著增加不定芽再生 频率，在进…步培养中经过 SNP 处理的叶盘的平均不定芽再生个数极显著高于 对照;发现了第四片展开叶再生频率最高。综合上述最佳条件，发现经过 4 周的 培养，就可再生出大量不定芽，再生频率可以达到 88%，比现有文献报道的先进 水平(约 53%) 有显著的提高。经过上述改进，缩短了麻疯树叶盘直接再生时间， 提高了麻疯树叶盘直接再生频率，从而建立了以麻疯树叶盘为外植体的高效直接 再生体系。 在建立麻疯树高效再生体系的基础之上，本研究以麻疯树叶撤为外楠体对其 蝴t:学位论文 蝴t:学位论文 麻州树的内放 fl}和然间转化研究 进行基因转化研究。首先测定了卡纳霉素， ì朝霉素，除草剂和头抱每素对麻疯树 叶盘诱导愈伤组织的影响:然后研究不同的选择压力，预培养时间，商液 OD 值 以及侵染时间对转化的影响:并且通过 GUS 染色发现抗性愈伤组织中的一部分 呈现蓝色，说明被转化基因在细胞中得到了表达。对愈伤组织转化成功地获得了 抗性不定芽。 关键词 t 麻疯树，叶盘，赤霉素，硝普俐，农杆菌，基因转化 11 做|丁学位 做|丁学位 含义 麻疯树的肉放再生和幕网转化研究 ABSTRACT Jatropha curcas L. is an important biofuel-producing plant，but its narrow cultivate range and low yield has limited large-scale cropping and commercialization as an energy plant. Some traits of Jatropha curcas L，such as resistance