调控肺脏发育的重要讯息呼吸道上皮均匀的布满分泌型细胞与纤毛细胞.PDF

Notch訊息調控- 肺臟發育的重要訊息 呼吸道上皮均勻的佈滿分 泌型細胞與纖毛細胞，但這些細胞是如何分 化與受到調控的呢 ?還有肺泡發育與呼吸道上皮是如何維持恆定的? 是什麼 在調控這些細胞命運的並不是很清楚 ，由文獻上的回顧我們猜想可能和 Notch訊息有關。 為了釐清這些問題，首先 我們主要的目的是要去看Notch的成員在肺臟 幹細胞的表現以及 Notch訊息是否參與幹細胞的再生及分化。利用組織特 異性的 Shh-Cre 老鼠，成功的製造出一隻肺臟上皮特異性的pofutl 基因剔除 鼠，亦即只在肺臟上皮細胞剔除所有 Notch訊息的基因剔除鼠，並發現這 種 pofutl 基因剔除鼠在出生後會逐漸喪失正常呼吸道的上皮組織，變成由許 多鱗狀上皮細胞所取代，這情形和一些因氣喘或慢性阻塞性肺疾病導致呼 吸道上皮病變很相像。再進一步去分析肺臟的各種上皮細胞組成，發現這 種 pofutl 基因剔除鼠的呼吸道中，從胎兒到成鼠時期，完全找不到分泌性的 上皮細胞 – Clara cells 。取而代之的是幾乎佈滿整個大小呼吸道的纖毛細胞 (ciliated cells)及過度增生的神經內分泌 細胞(neuroendocrine cells) 。同時，這種特 殊的肺臟表現型也可以在離體胎鼠肺臟 培養系統及另一種肺臟上皮細胞特異性 Notch訊息基因剔除鼠 (Rbpjk 基因剔除鼠) 身上完全重現。這個有趣的發現讓我們了 解到，在肺臟的發育過程， Notch訊息是 用來調控呼吸道纖毛細胞及分泌性上皮 的平衡 (Tsao et al. Development 2009; 1-1 136, 2297-2307) 。 接著我們想問出生後肺臟上皮的Notch訊息到底扮演什麼角色 所以? 我 們利用 Tgfb3-Cre 小鼠來製造條件式破壞肺臟上皮 Notch訊息的基因剔除 鼠。最近我們利用 RosaLacZ 小鼠來偵測Tgfb3-Cre的組織獨特性，我們發 現 Tgfb3-cre的 Cre蛋白表現在胚胎早期 (E14.5,此時 Clara cell及纖毛細胞 的分化正在進行的肺臟上皮是呈現) mosaic的型式，只有少數的肺臟上皮有 表現 cre ，但是在成鼠大部份的呼道上皮都有表現cre 。因此，我們可以利 用 Tgfb3-cre 小鼠製造出肺臟呼吸道上皮含( Clare cell)形成之才去破壞 Notch訊息的基因剔除鼠。利用 Tgfb3-Cre 小鼠來條件式剔除Notch訊息相 關基因 Pofut1 ，會造成明顯的出生後呼吸道的表現型，特點是明顯的杯狀 細胞增生、減少 Clara 細胞、及增加纖毛細胞的數目。相同的呼吸道表現 型也同樣可以再條件式 Rpbjk 基因剔除鼠身上。活體上的細胞追蹤結果顯 示這些過多的杯狀細胞是來自Clara cell的一個次族群，他們主要存在於近 端呼吸道而且是失去 Notch訊息的一群細胞。這個表現型也被證實和增加 許多和 杯狀細胞分化相關基因，而沒有增加細胞增生，沒有增加發炎反應， 而且合併減少 Hes5的表現量。 Luciferase reporter 分析顯示Notch會直接調 控肺臟上皮細胞中 Muc5ac的表現。這些結果讓我們認為在出生後， Notch 訊息是需要被用來預防 Clara 細胞分化為杯狀細胞 。而這種分泌黏液細胞