山葡萄果皮cDNA文库构建及相关基因的克隆与表达-作物栽培学与耕作学专业毕业论文.docxVIP

学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人 已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学 历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名：乏象邋 日期：磁笸生。!月咎旦 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档， 可以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送 交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论 文，按保密的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1． 保密 ，在 年解密后适用于 研究生签名：垒龟亟纽 导师签名： 万方数据 延边大学硕士毕业论文摘要 延边大学硕士毕业论文 摘要 山葡萄浆果含有前花色苷、蛋白质及矿物质等营养元素，是具有很高经济价 值的果树资源。本试验以山葡萄果皮为材料，成功构建了转色前果皮cDNA文 库；并利用RACE方法克隆了CHS和CHI基因cDNA全长序列，进行了生 物信息学分析；采用实时荧光定量PCR技术对山葡萄果皮成熟的7个时期的基 因表达进行了分析。主要研究结果如下： 以山葡萄转色前果皮为试验材料，采用In．Fusion@SMARTer@Directional cDNA Library Construction技术构建了cDNA文库，经鉴定，文库初始滴度及 扩增后滴度分别为1．1 5×1 06 pfu．mL。1和2．86×109 pfu．mL～，插入片段长度约为 0．5—2．0 kb，平均0．9 kb，重组率高达100％。这些结果说明，本试验在山葡萄转 色前果皮中成功构建了cDNA文库。为今后山葡萄功能基因分离克隆和功能基 因组学研究建立了基础。 通过RT-PCR结合快速扩增cDNA末端(RACE)方法，获得到了CHS 和CHI基因的全长cDNA序列。生物信息学分析结果显示，这两个基因都具 有完整的开放阅读框，其中，CHS基因的cDNA全长1 461 bp，含有一个1 182 bp的开放阅读框(ORF)，编码393个氨基酸残基的蛋白质；CHl基因的cDNA 全长955 bp，含有一个705 bp的ORF，编码234个氨基酸残基的蛋白质。共 有的特性是：均为稳定蛋白质、整个多肽链表现为亲水性、不含跨膜结构域、编 码的蛋白不具有信号肽、分子发育树分析表明，均与欧亚种葡萄同源性最高。 以山葡萄成熟过程中的7个时期浆果果皮为试验材料，ACTIN为内参基 因，采用实时荧光定量PCR技术，分析了CHS和CHI基因的表达模式。结 果显示，在7个时期中均有表达，除了转色前和10％转色时期二者的表达量 相近之外，其它5个时期中，CHS基因的表达量均明显高于CHI基因。且CHS 基因在七个时期中表达具有明显的规律性，从转色前至100％成熟期表达量呈 依次增加的趋势，完熟期表达量下降。而CHI基因的表达量没有明显的规律性， 转色前最低，完熟期最高。 关键词：山葡萄；文库构建；克隆；基因表达；荧光定量PCR 万方数据 AbstractVitis绷wP瑚括1S Abstract Vitis绷wP瑚括1S a kind of fruit tree resources with very high economic vaJue． w nlch bemes contain anthocyanins，protein and minerals and other nutrients．The study success如11Y constructed cDNA library of V．amurensis before skins coloring： The fhll-1ength cDNA sequences of CHS and CHI genes was cloned the by RACE technology觚a the bioinformatics was analyzed；The gene expression in seven sta2e of ∥绷靴刀s括 skins maturation Was analyzed by the real．time fluorescent quantitative PCR technology,the main results obtained are aS f01lo、vS： J ne penod before coloring skins of V．a