拉帕替尼诱导HER2阳性乳腺癌细胞凋亡机制及其与ABT--737的协同抗肿瘤作用-肿瘤学专业毕业论文.docxVIP

拉帕替尼诱导tier2阳性乳腺癌细胞凋亡的机制以及ABT-737和拉帕替尼的协同抗肿瘤作用 拉帕替尼诱导tier2阳性乳腺癌细胞凋亡的机制以及ABT-737 和拉帕替尼的协同抗肿瘤作用 中文摘要 目的：(1)探讨BH3．Only蛋白在拉帕替尼诱导Her2阳性乳腺癌细胞凋亡 中的作用及其与FOX03a蛋白的关系；(2)研究ABT-737和拉帕替尼联合应用与 Her2阳性的SK．BR3细胞的联合作用及其机制。 方法：(1)流式细胞仪Annexin V染色的方法检测细胞凋亡，Real Time PCR和Western blot检测Her2信号通路相关蛋白、BH3．Only家族蛋白和 FOX03a蛋白的表达在拉帕替尼处理后的差异，SiRNA技术抑制Bim和 FOX03a蛋白的表达，确定它们在拉帕替尼诱导的细胞凋亡中的作用以及 FOX03a蛋白对Bim蛋白表达的调控。(2)CCK．8法研究拉帕替尼和ABT-737 单用和联合应用的细胞效应，利用中位效应原理并使用Calcusyn软件分析两药 的联合作用。Western blot检测BCL．2家族蛋白在拉帕替尼单用和联合应用 ABT-737后的变化，免疫共沉淀法检测ABT-737对BCL．2蛋白拮抗Bim蛋白促 凋亡活性的抑制作用。 结果：(1)拉帕替尼作用于HER阳性乳腺癌细胞株BT-474和SK．BR3， 诱导细胞发生凋亡并伴有Caspase 3和BAX蛋白的激活，促凋亡的BH3．Only 家族蛋白之一Bim蛋白和FOX03a的表达增多，SiRNA抑制Bim和FOX03a 的表达，能够抑制拉帕替尼诱导的细胞凋亡，抑制FOX03a表达的同时，Bim 蛋白表达降低。(2)ABT-737和拉帕替尼联合应用于SK．BR3细胞能够产生协同 作用；拉帕替尼诱导SK．BR3细胞Bim蛋白表达增高，抗凋亡的MCL．1蛋白表 达降低；拉帕替尼诱导Bim蛋白表达增多同时与BCL．2蛋白结合也增多， ABT-737和拉帕替尼联合应用未改变拉帕替尼对BCL．2家族蛋白表达变化的影 响，但是能够抑制BCL．2蛋白和Bim蛋白的结合。 结论：(1)拉帕替尼能够诱导HER2阳性乳腺癌细胞BT474和SK-BR3细 胞发生凋亡，拉帕替尼诱导细胞凋亡可能通过转录激活激活Bim蛋白的表达， 激活线粒体细胞凋亡途径促进细胞发生凋亡，Bim蛋白的表达受FOX03a蛋白 的调控，因此，拉帕替尼可能通过抑制P13K／AKT信号通路，促进FOX03a蛋 白的表达增多，转录激活Bim蛋白的表达，激活线粒体细胞凋亡途径是细胞发 生凋亡。(2)ABT-737和拉帕替尼联合应用于Her2阳性的乳腺癌细胞SK-BR3 能够产生协同作用，其协同作用的机制可能为一方面拉帕替尼抑制了抗凋亡蛋 白MCL．1蛋白的表达，促进了ABT-737的抗肿瘤效应，另一方面ABT-737抑制 了拉帕替尼诱导Bim蛋白表达增多同时发生的与BCL．2蛋白的结合增多，促进 了Bim蛋白的促凋亡活性。 The The mechanism of apoptosis induced by Lapatinib in Her2 positive breast cancer cells and synergistic effective between ABT-737 and Lapatinib Abstract Objective：(1)To explore the role of BH3-Only family proteins in the apoptosis induced by Lapatinib in Her2 positive breast cancer cells BT-474 and SK—BR3 cells and whether regulated by FOX03a protein．(2)To study the synergy effect between BH3 mimitic compound，ABT-73 7 and Lapatinib in Her2 positive breast cancer cell SK—BR3 and explore the mechanism of the synergy effect． Methods：(1)The extent of apoptosis Was evaluated by flow cytometric analysis utilizing annexin V-fluorescein isothiocyanate staining method．The Her2 pathway protein，BH3-Only family protein and protein FOX03a were meas