色谱分离技术的演变和发展.DOCVIP

附件3-5 色谱分离技术的演变和发展 （张卫weizhang@sjtu.edu.cn） 一、本探究实验需要讨论的问题： A组： (1) 什么是色谱分离技术？它经历怎样的发展、演变过程？ (2) 简要说明色谱分析方法的基本原理，固定相和流动相的作用分别是什么？ (3) 柱色谱的色谱柱如何进行填充？填充过程中需要注意哪些问题？ (4) 简述柱色谱常用的洗脱剂及其洗脱能力的次序，如何选择合适的洗脱剂？采用柱色谱分离甲基橙和次甲基蓝混合染料时，为什么先用95%乙醇溶液作为洗脱剂，再用去离子水做洗脱剂进行洗脱，如果两者换一下次序是否可以？为什么？(5) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离 任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。 设计要求：通过文献查阅，判断所选的植物色素样本所含的色素种类有哪些？可以选取哪些合适的提取和分离色素的有机溶剂？如何分离各种不同的色素？设计相应的实验方法和步骤，给出所用的试剂及仪器。 拟提供的试剂与仪器：石油醚、丙酮、乙醇、碳酸钙、烘箱、纸层析滤纸、表面皿、培养皿、研钵、离心机等； B组： (6) 常用的色谱分析方法有哪些？分别有怎样的特点和适用范围？ (7) 薄层色谱中，最常用的固定相（吸附剂）有哪些？其颗粒的大小对于分离效果有何影响？影响固定相活性的主要因素有哪些？ (8) 薄层色谱的分离效果的评价指标是什么？如何进行计算？若化合物本身无色，薄层色谱的色谱图中组分迁移产生的展开斑点位置如何确定？试举例说明两种常用的确定方法。 (9) 采用薄层色谱分离顺式偶氮苯和反式偶氮苯的混合物时，若分别采用20:1环己烷-乙酸乙酯和10:1环己烷-乙酸乙酯作为展开剂，展开效果有何不同？为什么？(10) 设计实验：利用纸层析法进行植物色素的提取与分离 任意采集叶片、果皮等有色植物适量，经过烘干、研磨、溶剂浸提、离心分离、点样、展开等操作，提取与分离植物色素。 设计要求：通过文献查阅，判断所选的植物色素样本所含的色素种类有哪些？可以选取哪些合适的提取和分离色素的有机溶剂？如何分离各种不同的色素？设计相应的实验方法和步骤，给出所用的试剂及仪器。 拟提供的试剂与仪器：石油醚、丙酮、乙醇、碳酸钙、烘箱、纸层析滤纸、表面皿、培养皿、研钵、离心机等； 二、实验设计文本示例：层析技术用于分离有机染料 （一）实验目的 学习色谱法分离和鉴定化合物的原理和基本操作，了解和掌握薄层吸附色谱展开剂、柱色谱中洗脱剂、植物色素的提取和分离试剂的选择原则。 （二）实验原理 层析分离是利用混合物的各组份随着流动的液体或气体（称流动相）通过另一种固定不动的固体或液体（称固定相）时，在两相中分配（选择性溶解）、吸附或其他亲和性能的差别，达到分离的目的。 1、顺式偶氮苯与反式偶氮苯的分离 偶氮苯在通常情况下采取反式结构，紫外光照下发生异构化，形成一部分顺式结构。由于顺式偶氮苯的极性比反式偶氮苯稍大，可利用薄层色谱将二者分离。 ? 反式偶氮苯 顺式偶氮苯 二者极性不同，采用合适的展开剂加以分离。并比较不同的展开剂（如20:1和10:1环己烷-乙酸乙酯混合溶液）Rf值的差别及原因。 2、有机染料甲基橙和亚甲基蓝的分离 有机染料甲基橙和亚甲基蓝的结构式如下： 甲基橙 亚甲基蓝 甲基橙的分子极性大于次甲基蓝，利用二者极性差异，将两种洗脱剂先后加入色谱柱，分离不同的染料。 （三）实验仪器与试剂 仪器：薄层板，锥形瓶，50ml烧杯，毛细管，层析缸，色谱柱，脱脂棉花等； 试剂：光照过和未光照过的偶氮苯-苯溶液，硅胶G，0.5％羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液，20:1和10:1环己烷-乙酸乙酯混合溶液展开剂，甲基橙和次甲基蓝混合溶液，中性Al2O3，95％乙醇，去离子水，石油醚、丙酮等； （四）实验步骤 1．顺式和反式偶氮苯的分离 （1）点样 取2块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。取管口平整的毛细管插入样品溶液中，在板的起点线上点1％的未光照的偶氮苯的苯溶液和光照过的偶氮苯的苯溶液两个样点，样点间相距1～1.5cm。如果样点的颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点干燥后进行。样点直径不应超过2mm。 （2）展开 用20:1及10:1的环己烷-乙酸乙酯混合溶液为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的250ml层析缸中进行展开，点样一端应浸入展开剂0.5cm。盖好盖子，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm时取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后观察分离的情况，比较二者Rf?值的大小以及不同展开剂时Rf?值的大小。 2