茅台酒对正常大鼠肝脏细胞色素P4502E1及3A2表达的影响-内科学(传染病)专业毕业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届研究生论文 PAGE PAGE 1 茅台酒对正常大鼠肝脏细胞色素 P4502E1 及 3A2 表达的影响 专 业：内科学（传染病） 研究生：王文志 导 师：程明亮 教授 摘要 目的：观察茅台酒对大鼠生存率的影响，及对正常大鼠肝脏细胞色素450 2E1 （Cytochrome P450 2E1，CYP2E1）及细胞色素P4503A2（Cytochrome P450 3A2， CYP3A2）表达的影响。 方法：75只SD雄性大鼠随机分为5组，乙醇对照组（A组）、茅台酒高剂量组 （B1组）、茅台酒中剂量组（B2组）、茅台酒低剂量组（B3组）及正常对照组（C 组）各15只；用灌胃针灌胃，乙醇对照组大鼠按5ml/kg乙醇（530g/L）给予，茅 台酒高、中、低剂量组大鼠分别按10ml/kg、5ml/kg、2ml/kg给予茅台酒（530g/L）， 正常对照组大鼠用5ml/kg生理盐水灌胃，1次/天，6次/周，共12周。12周末统计 大鼠存活情况，称取大鼠重量，股动脉放血处死并剖腹取肝。采用RT-PCR，ELISA 检测各组CYP2E1及CYP3A2 mRNA及蛋白的表达；WB比较CYP2E1蛋白相对表 达量。 结果：茅台酒中剂量组大鼠生存率同正常对照组无差异，但明显高于乙醇对 照组（P0.05）；与正常对照组比较，茅台酒中剂量组大鼠肝脏CYP2E1 mRNA 水平升高（F值=238.41，P 0.01）；与乙醇对照组比较，茅台酒中剂量组大鼠肝 脏CYP2E1 mRNA表达量明显降低（F值=976.26，P 0.01）；比较茅台酒组间 CYP2E1 mRNA表达量，CYP2E1 mRNA呈剂量依赖性上升，差异有统计学意义 （F值=106.55，P0.05）；各组大鼠肝组织CYP3A2 mRNA无统计学无差异 （P 0.05）。ELISA 法测定CYP2E1蛋白绝对值，乙醇对照组、茅台酒中剂量组 及正常对照组间比较有差异，乙醇对照组大鼠CYP2E1蛋白量绝对值最高（F值 =70.03，P 0.01）；CYP3A2蛋白水平在上述各组中分别为7.01±0.68、8.07±1.53、 7.69±1.16、8.18±0.34、6.90±0.44，组间比较无统计学差异（F值=2.64，P 0.05）； 蛋白印迹法（WB）检测CYP2E1蛋白表达变化趋势与mRNA变化趋势一致。 结论：茅台酒中剂量组对大鼠生存率无明显影响，且显著高于等量乙醇组； 茅台酒可上调正常大鼠肝脏CYP2E1表达，对CYP3A2的表达无明显改变。 关键词 茅台酒；乙醇：肝脏；CYP2E1；CYP3A2； 英文缩写 英文全称 中文全称 ADH Ethanol dehydrogenase 乙醇脱氢酶 MEOS Microsomal ethanol oxidizing system 乙醇氧化酶系 Cat CYP4502E1 Catalalse Cytochrome P450 2E1 过氧化氢酶 细胞色素 P4502E1 CYP4503A2 Cytochrome P450 3A2 细胞色素 P4503A2 MT Metallothionein 金属硫蛋白 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 ROS Ct Reactive oxygen species Cycletkeshold 活性氧集团 循环域 前言 据世界卫生组织统计：全世界大概有1500万-2000万人酗酒，其中有10%-20% （150万-400万）有不同程度的酒精性肝病。40%-90%死于肝硬化的人群中，酒 精性肝病患者大约有2.6万人。在欧美国家，酒精性肝病是中青年死亡的主要原 因之一。随着生活水平的提高和社会经济的发展，饮酒已经成为日常生活中的常 见现象。在我国嗜酒者逐年增多，由酒精所致肝损伤的发病率呈逐渐上升的趋势， 酒精已成为继病毒性肝炎之后导致肝损害的第二大病因[1]。 细胞色素 P450（Cytochrome P450，CYP）主要位于内质网上的一组混合功能 氧化酶系，是肝脏组织中最重要的酶系之一。 CYP2E1 是微粒体乙醇氧化酶[2]，它存在于肝细胞内，是人体重要的 I 相物质 代谢酶。乙醇是 CYP2E1 酶的诱导剂，其不仅能够诱导 CYP2E1 酶活性增加， 且能使它的表达增加，CYP2E1 氧化乙醇过程中产生活性氧自由基（Reactive oxygen，ROS）[3]，可与细胞内的 DNA、蛋白质以及磷脂等结合加剧肝脏损伤。 并且参与药物、致癌物和毒物的活化过程，这些物质经过 CYP2E1 代谢活化可导 致某些疾病如酒精性肝病的发生[4]。 CYP3A 是一族重要的细胞色素氧化酶，在成人肝脏中该亚族占 P450 酶总含 量的