第三节免疫检测技术的基本原理.pptVIP

包被固相载体: 用已知抗原包被 固相载体 加待检标本: 使相应抗体与固相抗原结合 洗涤，除去无关的物质 加酶标抗抗体: 与固相载体上抗原抗体 复合物结合；洗涤，除去 未结合的酶标抗抗体 加底物 显色 根据颜色反应的程度进行 该抗原的定性或定量测定 （三）竞争法 此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体 。 用已知特异性 抗体包被 固相载体 测定管加待测抗原和 一定量的酶标抗原使二者与 固相抗体竞争结合 对照管只加一定量酶标抗原 与固相抗体直接结合 分别洗涤 除去未结合 的成分 加底物显色 分别测定两管的吸光度值， 根据对照管与测定管吸光度值之比， 计算标本中待测抗原含量 对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，使固相上结合的酶标抗原量减少。因此，加入底物后显色反应较弱。 饲料中盐酸克伦特罗的测定 饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 简曲霉毒素 ） 饲料中有害微生物的快速筛检 （如沙门氏菌 ） 甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析 在饲料安全检测中的应用 用于农药残留的检测 河豚毒素 植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素 苯并芘 主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（ ）、 甲氟磷酸异已酶（ ）、 草不绿（ ）、 西维因（ ）、 多菌灵及克菌丹（ ）等。 农药的检测： 食源性病原菌检测试剂盒 大肠杆菌检测 沙门氏菌检测 单增李斯特菌 金黄色葡萄球菌 转基因成份的检测：如转基因玉米中中的蛋白转基因大豆中的 蛋白质． 肉制品的掺假检测： 以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉检测种畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在掺假率为时即可检出 食品其他检测： 荧光抗体技术的原理与方法 用荧光素标记抗原或抗体，再与标本中抗体或抗原反应，然后在荧光显微镜下观察，形成的可散发出荧光，对标本中的抗原或抗体进行测定和定位。 常用的荧光素 异硫氰酸荧光素()、藻红蛋白()等。 常用的方法 直接荧光法 间接荧光法 免疫荧光技术 免疫荧光技术——直接法 Ag 荧光素标记的 特异性抗体 组织切片 免疫荧光技术——间接法 Ag 荧光素标记 的抗抗体 组织切片 待测抗体 免疫荧光技术 荧光显微镜 荧光显微镜使用原理 激发滤片（） 吸收滤片（） 标本 吸收光峰值： 发射光峰值： ： ： 免疫金标记技术 免疫金标记技术( ) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色（ ，）。 一、胶体金制备 　胶体金（ ）的制备一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子还原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶（ ）。 胶体金的制备及特性 胶体金粒径 柠檬酸钠加入量 胶体金特性 （) （)* 呈色 () 橙色 橙红色 红色 紫色 *还原 所需量 胶 体 金（ ） 优 质 劣 质 胶体金结合物（） 一、免疫渗滤测定() ? 斑点渗漏法 其原理与层析法相类同，中心圆点为一株单抗，边上小点为抗鼠二抗。先将待测样品滴在其中，若有抗原即被结合在中心圆点，洗去未结合抗原，再滴加金标另一株单抗，若有抗原则形成金?薄膜的红色斑点，而边上是金?薄膜的质控点，是为金标二步法。 ——双抗体夹心法测抗原 A B ——结果判断 二、免疫层析测定（ ） 层析法 将金标的一株单抗吸附于下端的玻璃纤维纸上，浸入尿液，此金标单抗即被溶解，并随尿液上行，若尿中有相应抗原，既形成金复合物，当上行至中段醋酸纤维薄膜，即与下端的另一株单抗结合并被固定下来，显示阳性结果。其上方还有一条抗鼠二抗，待红色金标单抗上行此处即被固定下来，作为金标单