JAP-018 吡蚜酮检测方法.pdf

吡蚜酮检测方法 1、分析目标化合物。 吡蚜酮 2、仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪和液相色谱—质谱仪。 3、试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 磷酸盐缓冲液（pH6）：0.2 mol／L 磷酸二氢钾溶液中加入0.2mol／L磷酸 氢二钾溶液，调节至pH6。 4．标准品 吡蚜酮：含吡蚜酮99％以上，熔点为217℃。 5．试验溶液的制备 a 提取方法 ① 谷类和豆类 将样品粉碎，通过420μm的标准网筛后，称取其10.0g，加入20ml水，放置 2小时。 加入100mL甲醇和5ml 0.5mol／L碳酸钾，搅拌3分钟后，用涂布1cm厚硅藻 土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取出滤纸上的残留物，加入50ml甲醇，搅 拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约5ml。 将其移入100mL分液漏斗中，用5mL水洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并 洗液于上述分液漏斗中，再用20mL正己烷洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并 洗液于分液漏斗中，缓缓振荡1分钟后，静置，弃去正己烷层，水层中再加入20mL 正己烷，按上述同样操作，弃去正己烷层，在将水层移入磨口减压浓缩器中， 用少量水洗涤分液漏斗，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约5mL，加 入5mL水。 ② 水果和蔬菜 水果和蔬菜：准确称取约1 kg样品，必要时定量加入适量水，搅切混合均 匀后，称取相当于20.0g样品的量。 加入100mL甲醇和5mL 0.5mol／L碳酸钾溶液（梅：3mol／L碳酸钾溶液）， 搅拌3分钟，用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取冲滤纸上 的残留物，加入50ml甲醇，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓 缩器中，45℃以下浓缩至约5ml，加入5m水。 b、净化方法 ① 乙基甲硅烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法 在乙基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）中注入10mL甲醇，弃去流出液。再注 入10mL水，弃去流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，注入10mL水，弃去 流出液。抽滤一分钟，除去水分。另外一根酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱（500mg） 中注入10mL甲醇，弃去流出液，在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱上面连接上述的 乙基甲硅烷基化硅胶小柱，注入20mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在 40℃以下除去甲醇，残留物中加入5mL乙醇：正己烷（1：4）混合溶液溶解。 ② 硅胶柱色谱法 在硅胶小柱（1000mg）中注入10mL正已烷，弃去流出液。柱中注入①乙基甲 硅烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入10mL 乙醇：正已烷（1：4）混合溶液，弃去流出液，再加入20mL乙醇：正已烷（2：3） 混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在40℃以下除去乙醇和正已烷，残 留物中加入5mL水：甲醇（9：1）混合溶液溶解。 ③ 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法 十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）中注入10mL甲醇，弃去流出液，再 注入10mL水，弃去流出液。柱中注入②硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入15mL 水：甲醇（9：1）混合溶液，弃去流出液，再加入10mL水：甲醇（7：3）混合溶 液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在45℃以下除去水和甲醇，残留物中加入 2mL水：甲醇（4：1）混合溶液溶解，此为试验溶液。 6、操作方法。 a 定性试验 按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。 柱：内径4.6mm、长250mm不锈钢管。 柱温：40℃ 检测器：波长298nm。 流动相：水：甲醇：磷酸盐缓冲液（pH6）（18：5：2）的混合溶液。调整流速 使吡蚜酮在10～12分钟流出。 b 定量试验 根据与a 定性试验相同的试验条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定 量。 c 确证试验 按照下列操作条件，用液相色谱—质谱仪测定，试验结果应与标准品的一致。此 外，必要时用峰高法或峰面积法进行定量。 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。 柱：内径2.0mm、长150mm不锈钢管。 柱温：40℃ 流动相：水：甲醇（4：1）混合溶液。调整流速使吡蚜酮在10～12分钟流 出。 7．定量限 谷类、豆类：0.01 mg/kg ，水果、