利用水稻悬浮细胞检测水稻白叶枯病菌突变菌株的致病性研究-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

利用水稻悬浮细胞检测水稻白叶枯病菌突变菌株的致病性研究摘要 利用水稻悬浮细胞检测水稻白叶枯病菌突变菌株的致病性研究 摘要 水稻抗白叶枯病基因‰23是从我国普通野生稻(Oryza rufipogon)中 鉴定出来的优良基因，对国内外鉴别菌系表现为高抗、完全显性和全生育 期抗病。目前未发现能克服物刀基因抗性的白叶枯病天然菌株。利用Tn5 转座系统构建了Xa23鉴别菌株P6的突变体库，约2．4万个突变菌株，期望 从中检测出能使携带砌刀基因的水稻材料感病的白叶枯菌株。 目前鉴定白叶枯菌致病菌株的方法主要采用水稻植株剪叶接种法和 注射接种法，这两种方法工作量大，且往往受水稻生长季节等条件的制约。 在实验室条件下，研究利用水稻悬浮细胞系检沏,JJP6突变体致病性实验系 统，为在细胞水平筛选和研究其它病原菌提供新的思路。研究结果如下： 1、以水稻中野1号的成熟胚为外植体，在pH值为5．8ff÷JN6诱导培养基 上诱导愈伤组织，25℃黑暗条件下继代培养3个月后，可以得到大量胚性 愈伤组织。选择淡黄色、质地疏松的胚性愈伤组织为悬浮培养的细胞来源， 并在pH值为5．6的N6液体继代培养基中，26。C，110．130rpm，暗光条件下进 行悬浮培养，再经过4．6次继代，可获得理想悬浮细胞系。 2、亲和菌株XMS．25、，XMS一30诱导的水稻细胞死亡率低，在1．78h内 与未经处理的对照无明显差异，表明亲和性菌株不能诱导水稻悬浮细胞过 敏性反应(Hypersensitive reaction，HR)。在非亲和菌株P6暑{I悬浮细胞非 亲和性互作中，48h前互作体系的死亡率和抽提液的颜色变化均不明显； 48—60h之间，悬浮细胞死亡率逐渐增加，抽提液的颜色也逐渐加深；60h 后，细胞死亡率增至最大，细胞死亡率和抽提液的颜色的变化均趋于稳定。 这说明：悬浮细胞在48h后开始大量死亡，也说明非亲和菌株能历导水稻恳 II 浮细胞产生HR。本研究建立了携带劢23基因的水稻品种中野1号的悬浮细胞系，系统 浮细胞产生HR。 本研究建立了携带劢23基因的水稻品种中野1号的悬浮细胞系，系统 研究了悬浮细胞与白叶枯菌P6及其突变体致病菌株的互作，发现中野1号 悬浮细胞与致病菌株互作中存在强烈的HR，溴酚蓝染色细胞抽提液的颜 色和0D595值可以作为检测致病菌株与非致病菌株的指标，建立了利用水 稻悬浮细胞系检0HJJP6突变体致病性的实验系统。 关键词：水稻白叶枯病 悬浮细胞突变体 白叶枯菌(Xoo)HR ，Study ，Study of Identifying Pathogenic Strains from Xoo Mutant Library Using Rice Suspension Cells Sun Liangqing (College of Agriculture，Guangxi University,Nanning 530004，China) Abstract The rice bacterial blight(BB)resistance gene，Xa23，was originally identified from Oryza rufipogon based on the resistance spectrum evaluation， resistance type and inheritance analysis．It is a complete dominant resistance gene with the widest resistance spectrum among all the known BB resistance genes identified SO far．To date，no natural Xoo strain that could infect rice harboring Xa23 has been found．We constructed P6 mutant library about 24，000 mutants by Tn5-derived transposon tagging system，and expected to discriminate a pathogenic strain that infect rice harboring Xa23． To date，there were two main methods of identifying pathogenic strain by leaf-cutting or infiltration with a needleless syringe．Two methods not only need lots of time，but also were re