提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测-中国医药生物技术.PDF

420 中国医药生物技术 2013 年 12 月第 8 卷第 6 期 Chin Med Biotechnol, December 2013, Vol. 8, No. 6 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.06.004 ·论著· 提高可利霉素药代动力学研究中 微生物法检测灵敏度的研究 戴剑漉，赵小峰，赫卫清，贾晓宇，李慧宁，王以光 【摘要】 性为目标的 BT 药代动力学研究至关重要。BT 药 目的 研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素，以提 品的含量测定方法系采用管碟法，参考《中国药 高血浆中测定可利霉素的灵敏度，为药代动力学研究中血药 [5] 典》 乙酰螺旋霉素微生物检定法，已经建立了 BT 浓度的测定奠定基础。 微生物检定法。但抗生素微生物检定法影响因素较 方法 采用管碟法和纸片法，以抑菌圈大小为指标，考察检 多[6]，且血浆直接测定微生物方法的灵敏度受限。 定菌液浓度，培养基配方，单、双层培养基检定平板，缓冲 本文拟通过研究检定菌液浓度、培养基、缓冲液、 液加 NaCl ，胎牛血清，血浆等多种因素对检测灵敏度的影 血浆以及血浆处理等对 BT 检测的影响，提高微生 响；采用有机溶剂从人血浆中萃取可利霉素等方法测定血药 物法测定 BT 的灵敏度，以满足该药药代动力学研 浓度。 究的需要。 结果 检定菌浓度、培养基配方、检定平板厚度对检测灵敏 度影响显著，含 NaCl 的缓冲液有利于提高检测灵敏度， 1 材料与方法 1.1 材料 人血浆对检测灵敏度有一定影响。以藤黄八叠球菌作检定 菌，其菌浓为 OD600 = 0.3 ~ 1.0 ，采用含牛肉蛋白胨 0.5% ， 1.1.1 试验材料 鱼胨、牛肉浸膏、牛肉蛋白胨、 牛肉浸膏 0.25% 检定培养基制备单层检定平板，可以有效 胰蛋白胨、酵母提取物为生化试剂；葡萄糖、氯化 提高可利霉素检测灵敏度 6 倍；从血浆中萃取可利霉素， 钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、无水碳酸钠、乙酸 乙酯和异丙醇为分析纯；乙腈为色谱纯；特级胎牛 用纸片法进行测定，其最低检测限度可达 0.02 μg/ml 。 血清由北京元亨圣马生物技术研究所提供；藤黄八 结论 所建立的从血浆中萃取可利霉素的纸片法显著提高 叠球菌[CMCC(B) 28001]由中国食品药品检定研 了微生物法检测血浆中可利霉素的灵敏度，可用于可利霉素 究院提供；可利霉素标准品（批号 167201207001 ） 药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。 效价 926 μg/mg，由沈阳同联集团有限公司提供； 【关键词】 微生物敏感性试验； 药代动力学； 可利 健康人空白血浆由北京大学第一医院血库提供；健 霉素 康人血浆取自经过伦理委员会审核批准的进行药 中国医药生物技术, 2013, 8(6):420-424 代动力学试验的 2 名健康受试者。 1.1.2 培