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逆转录又称反转录 (reverse transcription): 指遗传信息从RNA流向DNA。是RNA指导下的DNA合成过程,即以RNA为模板,四种dNTP为原料,合成与RNA互补的DNA单链(cDNA),催化这一过程的酶称反转录酶,RNA病毒中都含有此酶 。 酶: RNA指导的DNA聚合酶 (RNA-directed DNA polymerase,RDDP)。 RDDP有三种活性: RNA指导的DNA聚合酶活性RDDP; RNA酶(RNase)活性; DNA指导的DNA聚合酶活性DDDP。 反转录过程 RNA为模板,在反转录酶的催化下,合成与RNA互补的DNA单链,产物与模板形成RNA:DNA杂化双链;杂化双链中RNA被RNA酶水解;再以新合成的DNA链为模板,催化合成另一条与其互补的DNA链,形成双链DNA分子。 反转录方向:5’→3’。 逆转录研究的意义 复习思考题 1、DNA复制时不需要下列哪一种酶? A DNA指导的DNA聚合酶 B RNA指导的DNA聚合酶 C DNA指导的RNA聚合酶 D 连接酶 E 拓扑异构酶 2 下列关于DNA复制表述错误的是 A DNA 复制是以半保留方式进行 B DNA复制是有方向的,5‘→3’ C DNA复制是有方向的, 3’ →5‘ D DNA复制是半不连续的 3、DNA 复制时,如模板链为5′-TAGA-3′将会合成哪种互补结构? A 5′-TCTA-3′ B 5′-ATCT-3′ C 5′-UCUA-3′ D 5′-AUCU-3′ 4、名词解释 半保留复制 领头链 随从链 岗崎片段 5、在DNA 半保留复制中,两条新合成的链为什么都以5′→3′延长? * 双链打开 滚环复制 概念:低等生物、染色体以外的DNA,复制时采用滚环复制。 特点:环状DNA双链一股先开一个缺口,5′端向外伸展,DNA聚合酶则以此缺口的3’端作为引物,以另一条环状的单链DNA为模板,催化合成环状DNA的互补链。这种复制模式中,环状的DNA模板如同一边滚动一边进行连续的复制,因此称为滚环复制。伸展出的线性单链DNA模版可使新链由5’→3’进行复制;最后的产物可能是两个环状双链DNA,也可能是一个环状双链DNA、一个线性双链DNA。 第四节 真核生物DNA的复制 一、细胞周期: 细胞增殖时, DNA通过复制使其含量成倍增加,随后细胞分裂,成为两个子代细胞,DNA将亲代的特征传递到子代。细胞周期包括G1期、S期、G2期和M期, DNA的复制只发生在S期。 S: synthesis M: mitosis G1 and G2: Gap phases S G2 G1 M 二、复制的起始: 真核生物的DNA复制也是半保留复制。染色体线性分子的复制有多个起始点,每个起始点由两个反向运动的复制叉组成,进行双向复制。每个复制起始点到两边的复制终止点之间的DNA片段,称为一个复制子或复制单位。 ? many replication origins oriC oriC oriC oriC oriC oriC 三、复制的延长 α 只能延长约100个核苷酸,有引物酶活性; β 只是在没有其它DNA-pol时才发挥催化功能; γ 存在于线粒体,参与线粒体DNA的复制; δ 主要酶,延长领头链和随从链的冈崎片段; ε 在复制过程中起校读、修复和填补缺口的作用。 四、复制的终止: 端粒telomere:是真核生物染色体线性DNA分子 的末端特殊结构。 形态学上,染色体DNA末端膨大成粒状。 由末端DNA序列和蛋白质构成 末端DNA序列富含G、T碱基重复序列: 作用:维持染色体的稳定性 维持DNA复制的完整性。 端粒和端粒酶 端粒酶(telomerase) 一种含RNA-蛋白质复合物 RNA: 约有150个核苷酸,含CyAx重复序列, 它是合成端粒的TxGy链的模板。 蛋白:是一种逆转录酶,能以RNA为模板合成端粒DNA 作用:合成端粒DNA,维持端粒的长度 有关端粒酶 四膜虫中,端粒酶的活性消失使端粒逐步缩短,最后导致细胞死亡。 人
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