卵母细胞体外成熟过程中卵丘细胞上基因表达谱变化及其生物学意义-妇产科学（生殖医学）专业毕业论文.docxVIP

分类号：R71 分类号：R71 单位代码： 10312 密级： 学 号：南京医科六掌 硕士学位论文 题 研究生： 邵丽 指导教师： 崔毓桂教授千日成教授 学科专业： 妇产科学(生殖医学) 学院名称： 第一临床医学院 完成时间： ．-o一五年三月 万方数据 南京医科大学硕士学位论文学嚣嚣明 南京医科大学硕士学位论文 学嚣嚣明一学位论文原创性声明 ”Np¨’ 作者签名： 泸砺}玩 日期：．劢，睥6占月玎日 导师签名 日期：幽u年易月厂日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校 保留并向国家有关部门或机构送交论文复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权南京医科大学科一将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于(请在以下相应方框内打“、『” )： 1、保密口，在年解密后适用本授权书。 2、不保密口。 作者签名： 日期：孙Ⅳ年口6月心日 导师签名： 日期妒心年占月j’日 万方数据 南京医科大学硕士学位论文目 南京医科大学硕士学位论文 目 录 中文摘要 1 英文摘要 5 日Ⅱ芒； 1 1 材料与方法 ．16 结果术 ．28Z葛 讨 论 39 结{仑 5 1 参考文献 ．52 文献综述 ．60 英汉缩略语名词对照 ．82 攻读硕士学位期间发表文章情况 ．84 致 谢 85 万方数据 南京医科大学硕士学位论文摘 南京医科大学硕士学位论文 摘 要 卵泡作为卵巢的功能单位，由卵母细胞及包裹于其周围的颗粒细胞(granulo昭 cells，C,Cs)和外围的膜细胞组成。卵泡生长发育是一个复杂而又精细调控的过程， 期间卵母细胞逐步获得发育潜能，为后续受精及胚胎发育做准备。卵泡发育过 程中，随着卵泡腔形成，颗粒细胞分化为两种不同表型：①壁颗粒细胞(Mural granulose cells，MGCs)，位于卵泡腔周围，主要功能为类固醇激素合成及促进卵 泡壁破裂；②卵丘细胞(cumulus cells，CCs)，与卵母细胞紧密联系，两者构成 卵母细胞．卵丘细胞复合体(COC)。卵母细胞和CCs之间通过缝隙链接和旁分 泌信号通路相互交流，形成卵母细胞生长发育的微环境，并贯穿于整个卵泡发 育过程。在窦前卵泡阶段，卵泡生长不依赖于FSH的作用，主要通过GCs上表 达KIT配体(ⅪTL)，作用于卵母细胞上的受体KIT促进卵子生长；反过来， 卵子通过旁分泌因子(oocyte secrete factors，OSFs)，主要为生长分化因子9(GDF9) 和骨形态形成蛋白15(BMPl5)，作用于CCs促进CCs增殖、抗凋亡。在窦卵 泡阶段，CCs通过缝隙连接向卵子传递cAMP和cGMP等小分子物质以维持卵 母细胞减数分裂阻滞，同时其自身也受到OSFs的调节以拮抗FSH引起的黄素 化作用；在卵母细胞成熟阶段，卵母细胞和CCs相互协调完成卵丘扩张及卵母 细胞减数分裂恢复。此外，CCs为卵母细胞提供必须的代谢小分子如丙酮酸、丙 氨酸和胆固醇以供卵母细胞生长发育，同时卵母细胞促进了CCs三大代谢相关 酶的表达。卵母细胞．卵丘细胞这些紧密的相互作用，提示卵母细胞成熟过程中 在CCs上存在诸多印记，即CCs上的相关基因表达、分子和信号可以间接反应 卵母细胞发育成熟的状态。 卵母细胞体外成熟技术(IVM)指将未成熟卵丘卵母细胞复合体(GV．COCs) 从窦卵泡中取出，在特定的体外培养体系中培养成熟(MII．COCs)。IVM作为 一项辅助生殖前沿技术，尤其适用于卵巢过度刺激综合征(OHSS)患者及多囊 卵巢综合征(PCOS)患者。此外，近年来也有学者提出，在一些激素敏感性肿 万方数据 南京医科大学硕士学位论文瘤患者治疗前可应用IVM对其行生育力保存。但是大量的临床数据表明，和体 南京医科大学硕士学位论文 瘤患者治疗前可应用IVM对其行生育力保存。但是大量的临床数据表明，和体 内成熟卵子相比，IVM后的卵子发育潜能低，因此，IVM尚未广泛应用于临床。 探索IVM过程中卵丘细胞的状态及相关基因表达有助于深入理解卵母细胞成熟 机制并有望改进IVM培养体系。小鼠COC体外培养和IVM，是此类研究的最 常用模型。 近年来，随着高通量技术的发展，检测GCs或CCs上基因表达谱成为可能。 已见研究应用基因芯片技术及q-PCR技术尝试分析CCs与卵母细胞质量相关的 生物标记物；也有研究应用基因芯片技术确定了不同培养条件下CCs上的基因 表达谱差异。然而，鲜有关于IVM过程中CCs上基因表达谱变化的研究。因此， 我们认为，基于卵母细胞和卵丘细胞之间的相互交流理论，IVM过程中CCs上 的基因表达谱发生一系列的变化，通过