三氧化二砷对小鼠结肠癌CT26细胞及其移植瘤影响的实验研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

徐州医学院硕士学位论文 徐州医学院硕士学位论文 缩略词表 Abbreviation 缩略词 英文全称 中文全称 AS203 三氧化二砷 BSA Bovine Serum Albumin 牛血清蛋白 CSC cancer stem cell 肿瘤干细胞 ‘}／ CRC colon CanCer eell 结直肠癌细胞 DMSO dimethyl sulphoxide 二甲亚砜 EDTA Ethylene diaminetetracetic acid 乙二胺四乙酸 HE haemtoxylin and eosin 苏木素一伊红 ICC immunocytochemistry 免疫细胞化学 Ⅱ{C immunohistochemistry 免疫组织化学 R Inhibition rate 抑制率 lV intravenous injection 静脉注射 MTT 四甲基偶氮唑蓝 NS 生理盐水 OD Optical Density 光密度 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PAGE polyacrylamide gelelectrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 rpm rolls per minute 每分钟转速 SP side population cell 侧群细胞 、VB Western blot 免疫印迹 徐州I医学院顺I：学位论义三氧化二砷对小鼠结肠癌CT26细胞及其移植瘤影响 徐州I医学院顺I：学位论义 三氧化二砷对小鼠结肠癌CT26细胞及其移植瘤影响 的实验研究呋 中文摘要 r 目的研究三氧化二砷(As203)对小鼠结肠癌CT26细胞及其移植瘤作用的生 ～ 物学效应。探讨As203对其中的干细胞种群的影响和作用机制。为As203应用于 l 大肠癌的临床治疗提供理论基础和实验依据。 方法1．体外实验：培养小鼠结肠癌细胞株CT26，应用不同浓度的As203 (1．O、2．0、4．0、8．Ol上mol／L)分别作用于细胞24h、48h、72h。用MTT法分别检 测各个时l’日J不同浓度As203对细胞的抑制率；在倒置显微镜下观察A8203作用后 各组细胞中形态学特征的变化；应用免疫细胞化学(SP法)检测各实验组细胞中 CDl33和Musashi．1的表达；应用Western blot方法分别测定各组细胞中EPCAM、 CD44、Bax、Caspase．3的表达。 2．体内实验：大量的培养扩增CT26细胞，取对数生长期细胞制成细胞悬液 在小鼠腋窝皮下接种。反复传代两三次后，建立小鼠皮下移植瘤模型。待模型成 功复制后，将荷瘤小鼠随机分为3组：生理盐水组、As203低浓度组(治疗剂量 为1．0mg／kg．d)、As203高浓度组(治疗剂量为2．0mg／kg．d)。连续用药10天，术 次用药后24小时拉颈处死小鼠。分别测量各组小鼠体重、肿瘤重量和肿瘤体积， 计算各组肿瘤抑制率；分别取各自肿瘤组织以及肺、肝、肾、脾、等脏器，固定 一 后取材做蜡块，HE染色镜下观察其组织结构的变化；采用免疫组织化学(IHC)SP ～ 法检测瘤组织内CDl33、EPCAM、CD44、Ki67、Survivin、Bax、Caspase．3等的 表达情况。应用Western blot方法测定各各组肿瘤组织中Musashi．1和CD34的表 达。 结果1．体外实验：(1)细胞增殖抑制实验(MTT)显示：不同浓度的As203(1．0、 2．0、4．0、8．01上mol／L)作用CT26细胞24、48、72h后，与阴性对照组相比，细胞 徐州医学院硕士学位论文增殖受到不同程度的抑制。As203作用24h后抑制作用较弱，抑制率为7．49％～ 徐州医学院硕士学位论文 增殖受到不同程度的抑制。As203作用24h后抑制作用较弱，抑制率为7．49％～ 40．25％。而作用72h后其抑制作用较明显，抑制率为45．38％80．55％，各组间及 与对照组比较，差异有统计学意义(氏O．05)。不同浓度的As203对CT26的增殖抑 制作用随着As203浓度的升高和作用时间的延长越来越明显，即呈时间．浓度效应 依赖性。(2)显微镜下观察：各药物浓度组中贴壁细胞数量不同程度的减少，组 ．． ★P 间差别明显。同时可见细胞间隙增大、胞膜皱缩、胞体回缩、细胞逐渐变圆，可 见悬浮的凋亡细胞，并可见大小不等的凋亡小体。在高浓度组中这种作用更为明 ◆ 显，细胞呈单个生长。(3)免疫细胞化学结果显示：各药物干预组中CDl33和 Musashi．1阳性表达明显降低，且随着As203浓度增高，其降低作用越来越明显。 各组间及与阴性对照组相比，差异均有统计学意义(pO．05)。(4)Western blot检 测结果显示不同浓度As203(1