三氧化二砷对人肾小管上皮转分化的影响-内科学(肾脏病)专业论文.docxVIP

上海第二医科大学硕士学位论文(reverse 上海第二医科大学硕士学位论文 (reverse transcriptase—polymerase chain reaction，RT-PCR)的方法测定不同浓 度及不同时间点PDGF．BB对于HK．2细胞分泌细胞外基质(ECM)如：胶原 III(C01．III)、纤维连接蛋白(FN)的影响；同时观察As203干预经PDGF-BB 刺激后HK一2细胞分泌ECM的剂量和时间效应。结果提示：1)5ng／ml PDGF—BB上调HK一2细胞分泌ECM的作用最强，2)5ng／ml PDGF-BB作用 1h即可诱导HK．2细胞分泌C01．III、FN，8h达高峰，随着时间延长有减弱的 趋势，3)5ng／ml PDGFoBB作用48小时可以诱导HK-2细胞表达d．SMA。 结论：PDGF．BB可诱导HK．2细胞合成ECM增加并促进其发生转分化，而 A5203可以阻断其对HK-2细胞的作用。 为更好的评价As203在干预HK。2细胞转分化的作用，我们在第三部分研 究中观察了As203对由TGF．B 1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响，大量 研究显示TGF—p1是强有力的致纤维化生长因子，它不仅能打破肾间质细胞 外基质代谢大动态平衡，使其向纤维化方向发展，而且其在诱导肾小管上皮 细胞表型转化中作用突出。根据我科既往的研究，TGF．B 1刺激HK一2转分 化的最佳浓度为5 ng／ml，本实验证实其最佳刺激时涮是24小时。本研究应 用免疫荧光法观察HK．2细胞在不同浓度的TGF—B 1刺激下，Ⅱ一SMA的表 达以及As203干预后其表达的改变；以RT-PCR法检测5ng／ml TGF．B在不同 时间点对于HK一2细胞分泌Col—III、FN的影响，同时观察经TGF—B 1刺激后， 前加、后加As203影响HK-2细胞ECM分泌的剂量、时间效应的。同时我们 观察到5 ng／ml TGF—B l干预下，HK-2细胞由立方形铺路石样逐渐转变为梭 形氏条样，免疫荧光检测见梭形细胞胞浆中有大量n．SMA表达，提示细胞转 分化为肌成纤维细胞。5ng／ml TGF-B可促进HK．2细胞上调ECM的分泌，而 As203能明显的抑制HK．2细胞的转分化和ECM的沉积。 以上三部分的研究提示：低浓度的As203对HK一2的增殖和活力没有影响， 低浓度的As203可以抑制多种细胞因子诱导HK一2细胞的转分化，希望以上的 研究能为临床干预和治疗肾小管上皮细胞的转分化以及由此引起的肾小管间 质纤维化提供新的措施和策略。。 关键词二 肾小管阃质纤维化 血小板衍化生长因子转化生长因子 转分化 三氧化二砷 兰鳖缕塑丝墼Effects 兰鳖缕塑丝墼 Effects ofArsenic Trioxide on the epithelial transdifferentiation of human nephritic proximate tubule Histologically,glomerulosclerosis and tubulointerstitial fibrosis are major characteristics of end—stage renal disease(ESRD)．Many studies have showed that renal tubulointerstitial fibrosis is prone to play a more important rote in initiating and regulating events that lead to progressive renal failure than glomerulasclerosis． Unraveling the complexities of the cytokine and growth factor networks that underpin tubulointerstitial fibrosis has always been an important thing in Oili understanding of these events．Tubular epithelial—myofibroblastic transdifferentiation(TEMT)is a very important thing in this process．So it must be a core aspect in the field of nephrologic research to ditermine and intervent the factors which induce TEMT． First ofa