林生地霉血液分离株致病性的动物实验研究-皮肤病与性病学专业毕业论文.docxVIP

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河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 :.产, ;。式 碱 :猎徊杀签名劳办 导签《≥嚣 一 9 V年多舄矽沪 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:ji i夕。j≯∥导师签名:::’0鬟!。 口£年弓 月j驾日 中文摘要林生地霉血液分离株致病性的动物实验研究 中文摘要 林生地霉血液分离株致病性的动物实验研究 摘 要 目的:林生地霉(Geotrichum silvicola)为新近发现的 一种罕见地霉,首次从巴西果蝇和印度柞蚕幼虫身上分离出 来【1】o 2002年,我科从一例脓癣患儿的皮损中分离得到一株 林生地霉,首次证实该菌可以感染人类【21。2005年,我科又 自一例中毒性表皮坏死松解症患者的血液中分离出一株林 生地霉,说明该菌亦可以引起系统性感染【31。有关林生地霉 的形态学、分子生物学、营养生理学等各方面均已作了详细 的研究【20】。研究发现林生地霉血液分离株和皮损分离株在 菌落形态与基因序列上略有差异。 本研究采用动物实验的方法,将林生地霉血液分离株和 皮损分离株分别接种于不同免疫状态的昆明小鼠皮下、腹腔 及静脉,通过对实验小鼠的死亡率、28天内平均存活天数, 心、肝、脾、肺、肾组织的真菌逆培养阳性率及各脏器真菌 负荷量的检测,一方面来探讨机体免疫状态和感染途径对林 生地霉血液分离株系统性感染的影响,另一方面来研究林生 地霉血液分离株与皮损分离株在致病力方面有无差别。 方法: 1系统性林生地霉感染动物模型的制作 将我科保存菌株 活化后,接种于小鼠体内使其感染,解剖小鼠分离出恢复毒 力的菌株。分离出的菌株用无菌生理盐水制成菌悬液,分别 通过皮下、腹腔及静脉接种于不同免疫状态的昆明小鼠体 内。 中文摘要2小鼠生存状况及死亡情况的观察连续观察生存保护实 中文摘要 2小鼠生存状况及死亡情况的观察连续观察生存保护实 验各组小鼠接种后4周内的生存状况及死亡隋况,并计算各 组小鼠的死亡率及平均存活天数。 3各脏器大体改变将分期处死的小鼠解剖,无菌条件下取 其心脏、肝脏、脾脏、肺脏及肾脏,观察各脏器是否肿大或 萎缩、有无颜色改变及其表面有无脓性感染灶。 4组织真菌逆培养 无菌条件下将各脏器研碎后分别接种 于试管培养基中37。C培养,计数各组小鼠内脏逆培养阳性 数。培养阳性的菌落分别移种至平皿培养基及小培养的培养 基上培养,观察其菌落形态以及菌丝和孢子的形态。 5脏器真菌负荷量测定 无菌条件下取接种血液分离株小 鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和接种皮损分离株小鼠 的肾脏,匀浆后分别进行组织的真菌平皿培养,计算各脏器 的真菌负荷量。 6组织病理学检查取接种血液分离株小鼠的心、肝、脾、 肺、肾各脏器,用10%福尔马林溶液固定,常规脱水、透明、 包埋、切片,进行HE和PAS染色,光镜下观察其组织病理 学改变。 结果: 1小鼠感染后的生存状况 免疫正常小鼠接种林生地霉后, 其生活习性无明显改变。皮下接种组小鼠背部接种部位出现 一结节。免疫抑制腹腔组及免疫抑制静脉组小鼠的进食量明 显减少,并逐渐消瘦。 2小鼠感染后的死亡情况 免疫抑制腹腔组及免疫抑制静 脉组在接种林生地霉后均有小鼠死亡,而其它组无死亡小鼠 出现。接种血液分离株的免疫抑制腹腔组及免疫抑制静脉组 中文摘要小鼠的死亡率及平均存活天数与其它组比较,均有显著性差 中文摘要 小鼠的死亡率及平均存活天数与其它组比较,均有显著性差 异(PO.05);而其它各组间比较均无显著性差异(PO.05)。 在同一免疫状态和接种途径下,血液分离株与皮损分离株比 较,其小鼠死亡率及平均存活天数均无显著性差异 (PO.05)。 3各脏器大体改变小鼠解剖后,可见到不同程度呈紫红色 的肝脾肿大及呈白色、粉色的肺脏萎缩。腹腔接种组个别小 鼠脏器还可见粟粒大小脓肿。 4组织真菌逆培养小鼠内脏组织培养3天后可见真菌生 长,其菌落形态及镜下形态均与接种的菌株相同。免疫抑制 皮下组小鼠内脏逆培养阳性率明显低于免疫抑制腹腔组及 免疫抑制静脉组(尸O.05),而后两组比较其小鼠内脏逆培 养阳性率无显著性差异(PO.05);在同一组内,血液分离 株与皮损分离株比较,无

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