离子液体诱导溶菌酶结晶及机理研究-生物化工专业毕业论文.docx

留q久 留q久 蚴㈣i．1ilrfⅢIJlfl㈣I r[JIIlll删r|l Y1 874439。 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得 的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得苤鲞盘鲎或其他教育机构的学 位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 入 )，、 学位论文作者签名：参辆签字隰知(口年6月f≥日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解墨叠基茔有关保留、使用学位论文的规定。 特授权垂鲞态堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学 校向国家有关部门或机构送交论文的复目】件和磁盘。 (保密的学位论文在解密后适用本授权说明) 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 跏 ，■I 卜年： 、●●q石 引啊 ，--乱-nr气 f ，-- 乱 摘要随着生物技术的发展，蛋白质等生物大分子药物不断涌现，其独特的功能特 摘要 随着生物技术的发展，蛋白质等生物大分子药物不断涌现，其独特的功能特 性越来越受到人们的重视。蛋白质结晶过程复杂，影响因素多，且蛋白质晶体体 积较小，脱水易碎裂，对X．射线的衍射能力相对较弱，并且对温度特别敏感， 长时间暴露在辐射下晶体会损坏。制备适合X．射线衍射的蛋白质晶体是蛋白质 结晶的主要技术瓶颈之一，严重制约着蛋白质工程等新型生物技术的发展。 离子液体是指在室温下呈液态的盐类化合物。离子液体在催化领域取得了广 八 泛的应用，在许多的分离过程中被称作“绿色溶剂”。本文就是以溶菌酶为实验 对象，研究[C4mim]BF4，[C4mim]Cl，【C4mim]Br，[bmim]I四种离子液体对溶菌 ★ 酶结晶过程及晶体性质的影响，并对结晶机理进行初步探讨。 实验采用紫外分光光度法测量了溶菌酶的溶解度，及不同离子液体添加剂对 溶解度的影响，并与溶解度经验方程相关联；使用激光动态法测量了离子液体对 溶菌酶结晶诱导期的影响，并计算出表面张力和初级成核速率。 利用差示扫描量热仪(DSC)及各种热动力学分析方法对溶菌酶晶体热变性 及热降解过程进行了热动力学研究，用模型函数法(model．fitting method)和无 模型函数法(model．free method)求解动力学方程。 采用冷却结晶获得溶菌酶晶体，通过光学显微镜，偏光显微镜及XRD谱图、 傅立叶转换红外谱图、拉曼谱图对离子液体诱导溶菌酶结晶的机理进行了分析和 探讨，添加离子液体诱导溶菌酶结晶使溶菌酶晶体形态改变，并且XRD分辨率 改善；利用实时在线拉曼光谱仪分析不同离子液体添加剂下过饱和度对溶液中溶 茵酶分子结构及分子间作用力的影响；对获得的溶菌酶晶体进行生物活性的测 定，研究离子液体作为添加剂诱导溶菌酶结晶对其晶体活性的影响，实验结果表 示离子液体作用下，溶菌酶晶体的活性提高。 在实验的基础上使用Material Studio软件Morphology模块中BFDH、Growth Morphology模型对溶菌酶的理论晶习进行预测，预测结果与实验获得两种晶型 溶菌酶晶体形状基本一致。 关键词：离子液体溶菌酶初级成核热动力学机理分析晶习预测 ，、 ‘ ‘ ..401 ABSTRACTWith ABSTRACT With the development of biotechnology,biological macromolecular drugs such as protein quikely increase，whose unique functional properties have received more and more attention．The process of protein crystallization is a complicate process，and 八 there are many factors to affect the crystallization process．Besides，protein crystals are small and easy to fragment when dehydrated，and its X·ray distraction ability is ， pool．Protein crystals are particular sensitive t