2提质粒_分子生物学实验资料.pptVIP

1.2.2 实验程序 任务分配： A1和B1提取pET28a质粒 A2和B2提取pEGFP-N3质粒 2、细菌裂解及质粒的提取 将细胞沉淀悬浮于100ul溶液I中,充分震荡混匀。 加200ul溶液II(新鲜配制),盖紧管盖,轻轻混匀内容物,将离心管放冰上5min。 加150ul溶液III(冰上预冷),盖紧管口,轻轻颠倒数次使混匀。冰上放置5min。 12000rpm离心10min,将上清转至另一EP管（作好标记）中。 4、质粒的浓缩 加入2倍体积（900ul）无水乙醇,混匀后,室温放置10min。 12000rpm离心5分钟，倒去上清液,把离心管倒扣在吸水纸上,吸干液体。 用1ml 70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀, 振荡并离心, 12000rpm离心2分钟，倒去上清液, 空气中干燥5－10min。 * 实 验 一 质粒DNA的提取及鉴定 背景理论知识 Section 1 掌握质粒信息和用途，学会自己看质粒图谱 掌握快速提取小量质粒DNA的方法 了解质粒DNA提取的基本原理 掌握琼脂糖凝胶电泳的方法 1.1.1 实 验 目 的 1.1.2 载 体 定义：基因工程中携带目的基因进入宿主 细胞进行扩增和表达的工具。 类型：大肠杆菌中的质粒、?噬菌体、M13噬菌体、噬菌粒外，还有酵母人工染色体载体及动、植物病毒载体等。 载体的基本条件 复制子：一段具有特殊结构的DNA序列