猪精液稀释剂研究进展.DOCVIP

猪精液稀释剂研究进展 佟敬宾 （北京浩邦猪人工授精服务有限责任公司，北京顺义，101300） 摘 要：本文主要简述了猪精液稀释液的组成以及各种成分的功能，总结了目前猪精液稀释剂的研究进展，为稀释剂配方的开发理清思路。 关键字：猪 精液 稀释剂 研究 进展 公猪精液体外保存，是猪人工授精技术的重要环节，稀释剂的好坏是影响猪精液保存时间的主要因素，目前国内采用的稀释粉大部分是从国外进口的产品，还有小一部分是引进配方自行生产加工。稀释粉市场比较混乱，鱼龙混杂，没有专门化的评定标准和机构，使得生产者在购买稀释粉时比较盲目。因此，开发具有自主知识产权的稀释粉产品，打造国内最好的稀释粉品牌，势在必行。 目前常用的稀释粉配方有BTS、Kiev、Modena、Zorlesca、Androhep以及各种配方的改进配方，稀释液按精液保存时间可分为短效、中效、长效和超长效稀释剂，稀释剂中影响精子活力和功能的因素有pH值、离子类型和强度、介质渗透压以及抗菌素等，配方组成包括营养剂、缓冲剂、保护剂以及其他添加剂。 1营养剂 精液由精子和精清组成。精子不能合成有机物质，也不能贮存有机质，需要从精清中摄取，而精清中的营养物质含量有限，不足以长期维持精子活动需要，它会不断消耗能量（自身）而衰竭，因此要延长精液的保存时间，必须对精液进行稀释。精子代谢以利用果糖酵解为主，也可以利用葡萄糖、乳糖、甘露糖等小分子单糖。稀释剂中多用葡萄糖作为营养剂添加，同时葡萄糖的含量还影响稀释液的渗透压，猪精子可耐受的渗透压为240～380 mOsm/kg，维持一定的渗透压也是精液保存必不可少的条件之一。黄建国（1997年），通过添加葡萄糖进行渗透压的调整试验，结果表明在一定范围内冰点下降度（0.42～0.72），保存效果组间差异不显著。 2缓冲剂 猪新鲜精液的pH值为7.2～7.5，降低pH值可使精子代谢和运动水平降低，从而延长精子的存活时间。但也要防酸中毒，常用酸性缓冲剂有：柠檬酸钠、碳酸氢钠、酒石酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。这些弱酸盐类可以在溶液中维持水解-电离平衡，从而将稀释后的精液pH值控制在一定的范围内，确保精子不会因为pH的剧烈变化而死亡。目前，稀释液中还可添加Tris、Hepes等缓冲能力更强的缓冲剂。 另一方面，稀释液中的离子类型和强度对精子的活率有影响，较低浓度的氯化钾可以维持精子膜上Na+-K+泵的运转，防止细胞外K+耗尽而使精子丧失活力。还有些离子不利精子的存活，如有缓冲作用的HCO3-过量会导致精子质膜结构的改变诱发获能，Ca2+跨膜流入细胞会启动精子获能引起顶体反应，虽然获能是完成受精过程必需的，但对精子的保存却有害，因此在稀释液配制过程中需用双蒸水，并控制HCO3-的添加量，同时还可加入EDTA来螯合Ca2+等有害的金属离子。 3保护剂 低温保存过程中，精子易受到冷应激，导致活力下降，在稀释液中需加入保护剂。常用的保护剂有卵黄、牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）、甘油、海藻糖等，其中卵黄、甘油、BSA为渗透性保护剂，海藻糖属于非渗透性保护剂。 卵黄中含有磷脂和低密度脂蛋白，可以维持精子活力保护精子顶体膜作用；甘油进入细胞可以冲淡溶液中溶质盐浓度，细胞摄入盐量减少，改变了胞内过冷状态，使胞内压接近胞外压，降低了细胞脱水皱缩程度和速度，缓解了精子渗透性肿胀引起的损伤；蛋白类保护剂可改善保存精液的受精能力，BSA可能通过多个途径保护精子，弥补稀释造成的精清中蛋白类运动激活物的下降，维持精子运动；克服冷却过程中产生的溶血磷脂和自由脂肪酸造成的Ca2+易进入胞内的性质；选择性结合精子中段和主段质膜，稳定精子结构；中和精子和细菌代谢副产物，起一定缓冲作用和抗氧化作用；减少稀释造成的精子头部带相反电性电荷所引起的头对头凝集；但BSA在较高浓度下（3%）会诱导获能，因此要注意用量；海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷键构成的非还原性糖，自身性质非常稳定，并对多种生物活性物质具有保护作用，在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。 4.其他添加剂 精子在体外保存过程中，呼吸代谢产生活性氧族（ROS），精子产生的低浓度的ROS可以引发精子超激活运动和获能（陈大元等，2000），因为氧自由基氧化性很强，能氧化精子质膜的不饱和脂肪酸，干扰精子的代谢，造成过氧化损伤，使受精能力下降，可向稀释液中添加抗氧化剂来抵抗这种氧化压力，对保护精子质膜及抑制获能等有重要作用，如加入维生素E或半胱氨酸能抑制精子质膜上多聚不饱和脂肪酸的氧化，褪黑激素具有较强的抗自由基作用。 精液在采精和稀释过程中，还会混有微生物和杂质，稀释液中的营养成分和环境也适