杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌筛选及特性研究-微生物学专业论文.docx

IIIII IIIII I IlltLl II L LIIII Itl TI III {Y20041 55 华中农业大学学短论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 石 如需保密，解密时间 年 月 日 汐 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个入在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 愀张李。l例勇-丫帆幽雌多月7日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照 学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版，并提供目录检索和阕览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学 位论文的全部或部分内容，并授权中国科学技术信息研究所和北京万方数据股份有 限公司将本人学位论文收录到《中国碧位论文全文数据库》，并进行信息服务(包括 但不限于汇编、复制、发行、信息网络传播等)，同时本人保留在其他媒体发表论文 的权力． 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的 论文)在解密后适用子本授权书． 蚴黼挠司象彤撇∥禽Ⅳ冉 签名日期：幽，，年‘月7日 ‘签名日期：眵而，，年‘。月7日 、， ^ 「 杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌筛选及特性研究目 杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌筛选及特性研究 目 录 摘 要 I Abstract ．．III 缩略语表 ．V l 文献综述 1 1．1甘薯茎线虫病及其防治 l 1．1．1 引言 ．1 1．1．2甘薯茎线虫病的发生与分布 2 1．1．3甘薯茎线虫的生物学特性 3 1．1．4甘薯茎线虫的侵染机制和危害症状 3 1．1．5植物寄生线虫的综合防治 ．4 1．1．5．1 化学防治 。4 1．1．5．2物理防治 。5 1．1．5-3生物防治 5 1．2苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白基因的表达调控 ．．7 1．2．1苏云金芽胞杆菌简介 7 1．2．2苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白及其编码基因 7 1．2．3苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的表达调控 8 1．2．3．1 转录水平的调控 9 1．2．3．2转录后水平的调控 ．．9 1．2．3．3翻译后水平的调控 10 1．2．4 影响cry基因表达的几个其他因素 ．10 1．2．4．1基因拷贝数 10 1．2．4．2 cry基因之间的协同作用 ．．1l 1．2．4．3宿主细胞的影响 1l 1．3 苏云金芽胞杆菌防治植物寄生线虫研究进展 。11 1．3．1 苏云金芽胞杆菌对植物寄生线虫的杀虫活性 ll 1．3．2 苏云金芽胞杆菌的杀线虫基因和产物 12 1．3．3 苏云金芽胞杆菌对线虫的作用机制 13 1．3．3．1 苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白对昆虫的作用机制 13 1．3．3．2 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白对线虫的作用机制研究 ．14 1．4 研究的目的和意义 ．15 华中农业大学201 华中农业大学201 l届硕士学位论文 2材料和方法 l 2．1 实验材料 l 2．1．1菌株来源 1 2．1．2 PCR引物 1 2．1．3培养基 1 2．1．4抗生素及使用浓度 1 8 2．1．5供试线虫 l 8 2．2试剂和仪器 l 8 2．2．1 试剂 。l 8 2．2．2常用缓冲液和溶液 1 8 2．2．3 仪器 19 2．3实验方法 20 2．3．1供试苏云金芽胞杆菌的培养 20 2．3．2苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的SDS．PAGE 20 2．3．2．1 电泳样品的制备 ．20 2．3．2．2 晶体蛋白的SDS．PAGE ．20 2．3．3苏云金芽胞杆菌生物测定样品的制备 20 2 l 2 1 2 1 2 l 22 22 22 22 22 23 23 23 23 24 24 24 26 杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌筛选及特性研究3．1 杀甘薯茎线虫的苏云金芽胞杆菌筛选及特性研究 3．1 甘薯茎线虫的接种、培养和收集 ．．26 3．2 对甘薯茎线虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌筛选 ．．27 3．2．1 苏云金芽胞杆菌供试菌株 27 3．2．2供试苏云金芽胞杆菌的初筛 ．．29 3．2．3供试苏云金芽胞杆菌的复筛 3 l 3．2．4 YBT-008对甘薯茎线虫的LC50测定 ．31 3．3 YBT-008杀虫晶体蛋白基因的鉴定和验证 ．．32 3．3．1 YBT-008的生物学特性 ．．32 3．3．2 YBT．