利用iTRAQ蛋白质组学技术筛选与种公鸡繁殖力相关的候选蛋白分析-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

哪v叭2吣7洲-8㈣7眦5吣2哪4帆 哪v叭2吣7洲-8㈣7眦5吣2哪4帆 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过韵研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证 书而使用过韵材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了 明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 采弛 时间： ≯f矿年石月2日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科 学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不 同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 研究生签名： 太船 时间：7蚤f s年钿2．日 导师签名： 偶谚 时间： 夕f箩年石胃2曰 《 万方数据 中国农业科学院 中国农业科学院 硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 论文题目 利用iTRAQ蛋白质组学技术筛选与种公鸡繁殖力相关的候选蛋白 论文作者 薛夫光 专业 动物遗传育种 研究方向 家禽遗传育种 指导教师 陈继兰 培养单位(研究所) 北京畜牧兽医研究所 硕(博) 姓名 职称 导师 单 位 专业 签名 评 杨宁 教授 硕导口 中国农韭大学 动物遗传育种 ＼＼ 博导∥ 阅 颈导口 中国农业科学院 ＼＼． 人 李奎 教授 博导∥ 北京畜牧兽医研究所 动物生物技术 答 主 杨宁 教授 中国农业大学 动物遗传育种 1恕乙 辩 硕导口 博导彤 席 l 硕导口 中国农业科学院， 马月辉 研究员 博导∥ 北京畜牧兽医研究所 动物遗传育种 眵州蜉 答 硕导∥ 徐桂云 教授 博导口 中国农业大学 动物遗传育种 缮铉 辩 硕导口 邓学梅 教授 博导圈／ 中国农业大学 动物遗传育种 卵亏辔 委 硕导口 刘剑锋 教授 中国农业大学 动物遗传育种 白纠渗 } 员 博导∥ 硕导口 、’1 博导口 会议记录(秘书) 孙研研 论文答辩时间地点 纠啷斓31日吞妖ljf科辅持爱设蔓 万方数据 摘要中国地方鸡种肉蛋品质优良，抗病能力强，但繁殖效率较低。进一步调查发现，地方鸡无精 摘要 中国地方鸡种肉蛋品质优良，抗病能力强，但繁殖效率较低。进一步调查发现，地方鸡无精 症、弱精症比例较高，而且精液量的减少常常伴随着精子浓度降低，提高了地方鸡生产中公母配 比上升。增加了动物生产成本。研究发现：鸡精液品质性状为中等遗传力性状，较大程度上受到 遗传因素的影响。本研究目的是探究影响繁殖力的遗传因素。 蛋白质作为基因表达的产物，直接调控性状。本研究通过筛选低繁殖力公鸡与正常公鸡，比 较睾丸发育学和形态学特征，检测低繁殖力公鸡与正常公鸡睾丸组织蛋白表达量的差异，利用同 位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术及生物信息学分析，筛选与繁殖力相关的候选蛋白，并 进行蛋白质印迹法验证，为进一步深入研究影响公鸡繁殖力及睾丸发育分子遗传机制提供理论基 础和潜在方向。主要研究内容及结果如下： 1．低繁殖力公鸡挑选及睾丸特征比较。试验动物为42周龄相同环境下饲养北京油鸡公鸡200 只，通过精液品质检测和交配试验挑选出差异显著的低繁殖力与正常种公鸡各25只。52周龄获 取睾丸组织，称重，制作组织切片并观测睾丸精细小管形态，综合比较低繁殖力公鸡与正常公鸡 睾丸参数即生精上皮长，精细小管直径、面积，约翰逊评分等。结果显示低繁殖力组公鸡睾丸重 量、生精上皮长、精细小管直径、面积及约翰逊评分等睾丸参数显著低于正常组。根据试验结果， 挑选出3只低繁殖力公鸡及3只正常同胞公鸡，作为iTRAQ试验样本。 2．睾丸组织差异表达蛋白筛选、分析及验证。利用iTRAQ技术，对样本睾丸组织总蛋白进 行相对及绝对定量分析。对iTRAQ定量结果的分析，进行低繁殖力和正常个体及组间的睾丸组 织蛋白表达相互比较。结果发现，低繁殖力组上调倍数较大的蛋白为天冬氨酸氨基转移酶 (AspAT)、谷胱甘肽s转移酶(GST)蛋白和组蛋白H2A(HistoneH2A)，下调倍数较大的蛋白 有DNA损伤修复蛋I刍(DDB2)、T型中心粒蛋白(CENP—T)和G型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRG)。KEGG Pathway富集分析发现差异表达蛋白显著富集于嘌呤和嘧啶的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等信号 通路。利用蛋白免疫印迹法(Western Blotting)验证GST蛋白、AspAT蛋白和Histone H2A蛋白 在低繁殖力组和正常组睾丸组织中表达情况，结果发现蛋白表达趋势与iTRAQ技术检测结果一 致。 综合试验2结果，DDB2、CENP．I、AspAT、GST、S 100．A6和Hi