两个养殖海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落多样性分析-动物学专业论文.docxVIP

IIII IIII I I 11 1 1 1 IIII I I II IIl ＼1 927694 两个养殖海区及栉孑L扇贝消化盲囊 细菌群落多样性分析 学位论文完成日期： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含 其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得——或其他教 育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：柄粼艮 签字日期：扫／『年f月2广日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留 并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学 技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络 向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：扔铂t莨 新擗黜 签字日期：1·tt年卜月蚪日 签字日期：伽11年6月 两种不同扇贝养殖模式海区及柑孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化 两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化两个养殖海区及栉孔扇贝消化盲囊 两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化 两个养殖海区及栉孔扇贝消化盲囊 细菌群落多样性分析 摘 要 细菌是海区生态环境的重要组成部分，本研究为了解单一养殖模式与贝藻混 养模式下的扇贝养殖海区细菌群落结构的季节性变化以及不同模式下细菌群落 结构的异同，运用PCR．DGGE技术对沙子口和桑沟湾2种不同养殖模式海区的 细菌群落结构组成进行了分析。连续7个月(2009年5-11月)和11个月(2009 年5月～2010年4月，2月除外)分别定点采集桑沟湾和沙子口养殖海区水深O．5 m和3 nl处的水样，过滤收集粒径在O．22~3 pm的微生物，采用CTAB-法提取样 品总DNA，扩增细菌16S rDNA V3~V5可变区序列，并通过变性梯度凝胶电泳 (Denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)技术对所得序列进行分离，采 用软件Quantity One和SensiAnsys进行DGGE指纹图谱分析。试验结果如下： 1)桑沟湾海区DGGE图谱共得到231条条带，其中处于不同位置的条带数 为26条，每个月份条带数在14～23之间，平均数为19．4l。同一月份水深O．5 m 和3 m处的细菌群落组成极为相似(73‰9l％)，不同月份间的细菌群落差异较 大，其中8月份细菌种类最为丰富。基于各月份DGGE条带数目和亮度进行 UPGMA聚类分析，7个月份的样品中，6、7和11月聚为一类，8、9和lO月聚 为一类，5月单独聚为一支。对DGGE图谱中的11条主带进行回收、重扩增和 测序，结果表明，这11条序列与GenBank中已登录的细菌物种同源性在91％～99％ 之间，同源性分析结果表明这些序列中，a．变形菌亚门(a-Proteobactefia)、拟 杆菌f-1(Bacteroidetes)和放线菌门(Aetinobaeteria)均占所测序列的27．3％， B．变形菌亚l-J和Y．变形菌亚门各占9．1％。所分析的11条序列中有lO条序列 与GenBank中登录的未成功培养细菌的序列相似度高。 2)沙子口11个水深0．5 m处细菌样品(2月除外)的DGGE图谱共得到198条 条带，其中处于不同位置的条带数为36条，每个月份条带数在15~23之间，平均 数为18。其中1月份条带数最多，3月份条带数最少。UPGMA分析显示，11个月 份的样品中，春季(3～5月)聚为一大类，夏季到冬季(6~1月)聚为另一大类。 对20条荧光强度较高的条带进行测序，发现所有序列与数据库中16S rDNA序列 两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化的最大相似性在94／o--100％之间。获得的20条序列分属于4个门，其中Q．变形菌 两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化 的最大相似性在94／o--100％之间。获得的20条序列分属于4个门，其中Q．变形菌 亚门占所测序列的35％，p．变形菌亚门和丫．变形菌亚门均占10％，拟杆菌门占 25％，放线菌门占15％，疣微菌门(Verrucomicrobia)仅占5％。比对结果显示， 20条序