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微生物学实验复习提纲 1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术） 2.光学显微镜又称“复式显微镜”，由哪两部分组成？显微镜的什么最为关键？为什么？ 答：由机械装置和光学系统组成 物镜的性能最为关键，因为它直接影响着显微镜的分辨率 3.油镜的放大倍数为多少？与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头间滴加什么？其什么作用？ 答：10*100 需要滴加镜油 增加照明亮度和增加显微镜的分辨率 4.影响显微镜分辨率的因素有哪些？（光源的波长、物镜的镜口角和镜头间介质的折射率） 5.油镜使用后应怎样处理？镜油擦拭的正确方法是怎样的？ 答：用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯 6.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却. 7.培养皿的包装一般以多少套作一包比较合适？5~8套。 8.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。 9.空的玻璃器皿一般用 干热灭菌 ，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。 10.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。 11.简单染色的原理是什么？其主要操作步骤是什么？固定的作用是什么？染色过程中应注意哪些环节？答：原理及步骤健实验课本71页。固定作用：使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上 12. 革兰氏染的原理及步骤是什么？革兰氏染色后的正确结果是什么颜色？ 答：原理见实验课本82页 步骤：初染、媒染、脱色、复染 结果颜色：阳性：菌体保持原有的蓝紫色 阴性：洗脱后菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色 13.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：（1）涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性； （2）脱色，此环节最关键。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。 （3）菌龄也影响染色结果。如阳性菌培养时间过长或已死亡及部分菌自行溶解了，会出现阴性反应。 14.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？ 答：1.、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色 2、平板菌落计数法 15.霉菌的直接制片观察法常用什么染色剂？此染液的优点是什么？ 答：乳酸石碳酸棉蓝染液 优点：石碳酸可以杀死菌体及孢子并可以防腐，乳酸可以保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。 16.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？ 答：细菌：湿润、光滑、透明、粘稠、易挑起、质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。 放线菌：质地致密、丝绒状或有皱折、干燥，不透明，上覆盖有不同颜色的干粉（孢子），菌落正反面的颜色常不一致，基内菌丝与培养基结合较紧，难以挑起。 酵母菌：菌落与细菌的相仿，比细菌菌落大而且厚，菌落表面湿润、粘稠、易被挑起，其颜色多为乳白色，少数为红色。同时会散发出悦人的酒香味。 霉菌：菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致等。 17.为什么霉菌菌落的中央与边远、正面与反面在外形、颜色、构造等方面常有明显的差别？放线菌、细菌和酵母菌呢？（理解） 18.测量微生物大小的工具是什么？包括哪两部分？功能各是什么？ 答：显微测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺，目镜测微尺测量细胞大小，镜台测微尺校正目镜测微尺每格的相对长度 19.如何校正目镜测微尺刻度？计算公式？更换不同放大倍数的目镜活物镜时，是否需要重新校正？ 答：校正方法、公式见实验课本49页，需要重新校正 20.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？ 答：化学成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 物理状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基 用途：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基 21.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？ 答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化， 22.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？ 答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约 方法：生态模拟、参阅文献、精心设计、