肝素抗凝血作用实验报告.docxVIP

肝素的抗凝血作用实验报告 　　试验8肝素对小鼠的抗凝血作用　　【目的】　　1.熟悉抗凝血药的筛选方法。　　2.观察肝素的抗凝作用和硫酸鱼精蛋白的解救效果。【原理】　　肝素为硫酸化的糖胺聚糖，分子量为3~30kDa，其中硫酸根约占40%，硫酸根呈强酸性，带大量负电荷。肝素能增强抗凝血酶Ⅲ与凝血酶等活化型凝血因子的亲和力，产生体内外抗凝作用，主要灭活IIa和Xa，也灭活IXa,XIa,XIIa,激肽释放酶和纤溶酶等。　　硫酸鱼精蛋白呈碱性，带有大量正电荷，如果肝素过量造成出血，则可用硫酸鱼精蛋白中和解救。【材料】　　1.器材：注射器、电子秤、玻片、针头；　　2.药品：%肝素溶液、生理盐水、1%硫酸鱼精蛋白，苦味酸；3.动物：小鼠12只，20g左右，雌雄兼用。【试验步骤】1.小鼠标记，称重；　　2.分组，分为3组，每组4只，分别为A、B和C组；3.给药：　　A组：腹腔注射生理盐水，ml/10g，10min后测定凝血时间；B组：腹腔注射肝素，ml/10g，10min后测定凝血时间；　　C组：腹腔注射鱼精蛋白，ml/10g；10min后腹腔注射肝素，ml/10g，10min后测定凝血时间；4.测定凝血时间的方法　　①眼球后静脉丛取血2滴。眼球后静脉丛取血法：左手拇指及中指抓住头颈部皮肤，左手掌尽量将小鼠全身皮肤向左移，慢慢使小鼠右眼球突出，小鼠头向下充血。取长约2cm的毛细管从内皉间45度角进针，至有抵骨　　质的感觉，然后毛细管向外拔出约1-2mm即可有血滴流出。　　②采出的血滴分别置于洁净的玻片上，计时；　　③每隔30s用针头自滴血内连续挑起纤维丝为止，计时。另一滴血作为最后挑起纤维丝的对照。　　④正常小鼠血液的凝血时间为，如果观察10min无凝血可计时为10min。　　5.汇总全实验室结果，数据统计分析，得到平均值，标准偏差，StudentT-Test得到P值。【结果】　　表1小鼠的凝血时间　　表2全实验室小鼠凝血时间　　组别A组B组C组　　【注意】　　玻片法挑动血滴，经横贯血滴直径，连续能挑起纤维丝为凝血时间终点。如果过分挑动，变成纤维血滴则始终不出现纤维丝，所以同时放2滴血，核对另外一滴血很有必要。组1　　组2　　每个实验小组的平均值组3　　组4　　组5　　组6　　组7组8　　T　　P值　　影响血液凝固的因素　　实验目的：通过本实验来了解血液凝固的基本过程及了解影响血液凝固的一些因　　素。　　实验对象：家兔　　实验步骤：　　实验结果：　　1、观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用：实验中可见到静置杯内血液发生凝固。搅拌杯　　内血液不凝固，但在毛刷上见到红色的血凝块，经水冲洗后毛刷上缠绕有白色丝状物。　　2、观察影响血凝的一些理化因素：如下表9-1所示。表9-3影响血凝的一些理化因素实验条件　　1.加少许棉花　　2.用石蜡油均匀涂试管内壁　　3.放置37℃水浴　　4.放置冰水水浴　　5.加肝素10个单位　　6.加草酸钾2mg　　3、观察内源性及外源性凝血过程：如下表9-2所示表9-2内源性和外源性凝血过程的观察试剂　　1、富血小板血浆　　2、少血小板血浆　　3、生理盐水　　4、羊肺悬液　　5、/lcacl2血液凝固时间　　讨论：　　血液凝固是指血液由流动的液体状态变为不流动的冻胶状态血液凝固过程大致分为三个　　主要阶段：①凝血酶原激活物形成；②凝血酶原激活成凝血酶，③纤维蛋白原转变为纤维蛋　　白。在凝血酶原激活物的形成过程中分有两种不同的途径：内源性凝血途径和外源性凝血途　　径。内源性凝血途径是由凝血因子?启动的，参与血凝的全部凝血因子都在血浆内。凝血因子?　　可被各种带负电荷的物质等所激活，如血管内膜暴露的胶原纤维、玻璃、陶器等。外源性凝　　血途径是由存在于血管外组织中的凝血因子ⅲ所启动的，其余参与的凝血因子也在血管内。　　凝血因子ⅲ在脑、肺、胎盘组织含量很丰富。不管是内源性凝血途径或外源性凝血途径，他们最后的是使血纤维蛋白的形成而使血液　　发生凝固。在观察纤维蛋白原在凝血过程中作用的实验中，由于参与凝血的全部凝血因子都　　在血浆中，因此其凝血过程是属于内源性凝血。由于玻璃和毛刷表面都带有负电荷，后者可　　激活凝血因子?，启动内源性凝血过程。凝血到最后阶段时，在凝血酶的作用下，把纤维蛋白　　原水解成血纤维蛋白；形成的纤维蛋白不断地交叉成网状结构，把血液中的所有血细胞网凝　　血时间50’’8’15’’2’15’’6’45’’不凝不凝试管1mlmlml2’　　15’’试管2mlmlml3’45’’试管3mlmlml45’’罗于其中，从而使血液发生凝固。静置杯中的血液，由于发生了上述的血液凝固过程，　　所形成