硫酸铵鉴定实验报告.docx

硫酸铵的鉴定实验报告 　　实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应　　一、实验目的　　掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一步熟悉蛋白质的有关反应。　　二、实验原理　　蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同的蛋白质由于所含的氨　　基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物　　质也可产生同样的颜色反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另　　外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲水性胶体，在溶液中的　　稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生　　了变化，破坏了蛋白质的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。　　三、实验仪器　　1、吸管2、滴管3、试管4、电炉5、ph试纸6、水浴锅7、移液管　　四、实验试剂　　1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20倍，3-4层纱布过滤，滤液放在冰箱里冷藏　　备用。　　2、%苯酚：1g苯酚加蒸馏水稀释至200ml。　　3、millon’s试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸溶解后，冷却，加二倍体　　积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可长期保存。　　4、尿素晶体　　5、1%cuso：1gcuso晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml446、10%naoh：10gnaoh溶于蒸馏水，稀释至100ml　　7、浓硝酸　　8、%茚三酮溶液：茚三酮溶于95%的乙醇并稀释至100ml.　　9、冰醋酸　　10、浓硫酸　　11、饱和硫酸铵溶液：100ml蒸馏水中加硫酸铵至饱和。　　12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。13、95%乙醇。　　14、醋酸铅溶液：1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml　　15、氯化钠晶体　　16、10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至100ml　　17、饱和苦味酸溶液：100ml蒸馏水中加苦味酸至饱和。18、1%醋酸溶液。　　五、实验步骤　　蛋白质的颜色反应　　米伦反应　　1、苯酚实验：取%苯酚溶液1ml于试管中，加millon’s试剂，电炉小心加热　　观察颜色变化。　　2、蛋白质实验：取2ml蛋白液，加millon’s试剂，出现白色的蛋白质沉淀，小　　心加热，观察现象。　　双缩脲反应　　1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新结晶时冷却。然后加　　10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%cuso4溶液，混匀，观察现象。　　2、取蛋白液1ml，加10%naoh溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1%cuso4溶液，混匀，观察　　现象。　　黄色反应　　取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入　　10%naoh溶液1ml，观察颜色有什么变化。　　茚三酮反应　　取蛋白液1ml于试管中，加4-8滴茚三酮溶液，加热至沸，即有蓝紫色出现。蛋白质的沉淀　　蛋白质的盐析作用　　1、试管中加蒸馏水3ml，加固体硫酸铵至饱和。另一支试管加蛋白液2ml，再加入饱和　　硫酸铵溶液2ml，摇匀静置观察现象。　　2、将上述混合液过滤。向滤液中逐渐加入少量固体硫酸铵，直至饱和为止，此时析出为　　清蛋白。再加入少量蒸馏水，观察沉淀是否溶解。　　有机溶剂沉淀蛋白质　　试管中加蛋白液1ml，加晶体氯化钠少许，溶解后加95%乙醇3ml,摇匀，观察现象。　　重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质　　1、取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫　　酸铜溶液，至有沉淀产生。　　2、取一支试管加蛋白液2ml，再加入10%三氯乙酸1ml，充分混匀，观察结果。　　生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，观察现象。　　六、实验结果　　蛋白质的颜色反应　　米伦反应　　1、苯酚实验：　　溶液即出现玫瑰红色。　　2、蛋白质实验：　　出现白色的蛋白质沉淀，小心加热后凝固的蛋白质出现红色。　　双缩脲反应　　1、有紫色出现。　　2、溶液有蓝紫色出现　　黄色反应　　先有黄色沉淀生成，加入10%naoh溶液1ml后颜色变为橘黄色。　　茚三酮反应有蓝紫色出现。　　蛋白质的沉淀　　蛋白质的盐析作用　　1、有蛋白析出。　　2、有蛋白质析出，加水后可复溶。　　有机溶剂沉淀蛋白质取一试管加蛋白液1ml，，加入晶体氯化钠少许，待溶解后再加95%乙醇3ml,摇匀，观察　　现象　　重金属盐与某些有机酸沉淀蛋白质取试管2支，各加蛋白液2ml，一支管中滴加1%醋酸铅溶液，另一支管中滴加1%硫酸铜　　溶液，至有沉淀产生。　　生物碱试剂沉淀蛋白