临床分离黏质沙雷菌染色体及质粒介导的喹诺酮类耐药基因的检测及其与β-内酰胺酶和16S rRNA甲基化酶基因的相关性分析-内科学(传染病)专业论文.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文 致谢50 综述51 参考文献57 安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 缩 略 词 表 英文简称 英文全称 中文全称 S. marcescens Serratia marcescens 黏质沙雷菌 E. coli Escherichia coli 大肠埃希菌 ATCC American type culture collection 美国模式培养物集存库 MIC Minimal inhibitory concentration 最低抑菌浓度 AMP Ampicillin 氨苄西林 PIP Piperacillin 哌拉西林 P/T Piperacillin/ tazobactam 哌拉西林/他唑巴坦 CTX Cefotaxime 头孢噻肟 FOX Cefoxitin 头孢西丁 CAZ Ceftazidime 头孢他啶 CRO Ceftriaxone 头孢曲松 FEP Cefepime 头孢吡肟 CFP Cefoperazone 头孢哌酮 CIP Ciprofloxacin 环丙沙星 LVX Levofloxacin 左氧氟沙星 GAT Gatifloxacin 加替沙星 GM Gentamicin 庆大霉素 AMK Amikacin 阿米卡星 CHL Chloramphenicol 氯霉素 ATM Aztreonam 氨曲南 IMP Imipenem 亚胺培南 MEM Meropenem 美罗培南 QRDR Quinolone resistance determining region 喹诺酮耐药决定簇区 PMQR Plasmid-mediated quinolone resistance 质粒介导喹诺酮类耐药 CLSI Clinical and Laboratory Standard Institute 美国临床实验室标准化委员会 临床分离黏质沙雷菌染色体及质粒介导的喹诺酮类耐药基 因的检测及其与β-内酰胺酶和 16S rRNA 甲基化酶基因的 相关性研究 中文摘要 目的 了解安徽地区 2005~2010 年临床分离的 104 株黏质沙雷菌耐药情况和染色体及质粒 介导的喹诺酮类耐药基因的种类、分布，为临床合理选择抗菌药物提供依据。 研究临床分离黏质沙雷菌染色体及质粒介导的喹诺酮类耐药基因与 β-内酰胺酶和 16S rRNA 甲基化酶基因的相关性。 材料与方法 菌株来源 104株黏质沙雷菌临床分离株来自安徽省细菌耐药监测中心2005年~2010年每年9月 份收集的监测网所属34所医院 (由皖南、皖中、皖北不同级别的医院组成) 住院和门诊 患者的各类临床标本。质控菌株大肠埃希菌ATCC25922，转移接合试验受体菌大肠埃希 菌J53 AZR为安徽省细菌耐药监控中心保存。 方法 1. 采用琼脂倍比稀释法进行抗菌药物敏感性试验，药物敏感性试验质控菌采用 E.coli ATCC 25922。 2. 用煮沸法提取细菌总 DNA，碱裂解法提取质粒；用聚合酶链反应(PCR)方法扩增染 色体 gyrA 与 parC 基因和质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因；PCR 产物纯化测序， 结果与 Genbank 中基因序列进行比对，以明确 gyrA 与 parC 基因是否突变以及质粒 介导喹诺酮类耐药基因的基因型。 3. 用 PMQR 基因阳性菌株与大肠埃希菌 J53AzR 行转移接合试验；采用琼脂倍比稀释 法对受体菌与接合子进行最低抑菌浓度(MIC)测定。 4. 临床分离菌株的总 DNA 为模板，PCR 方法扩增 β-内酰胺酶和 16S rRNA 甲基化酶 基因；对 PCR 产物进行测序，结果与 Genbank 中基因序列进行比对，以明确基因型。 然后用接合子的质粒 DNA 为模板，PCR 扩增 β-内酰胺酶和 16S rRNA 甲基化酶基 因，验证这些耐药基因是否同时发生转移。 结果 1. 粘质沙雷菌在呼吸道痰标本中检出率最高，达59.6%；主要分布于呼吸内科、重症 监护病房、老年病科等；药敏结果显示，粘质沙雷菌对1、2代头孢菌素表现出很高 的耐药性，耐药率在79.8%-91.3%以上；对左氧氟沙星、加替沙星，4代头孢菌素比 PAGE PAGE 3 较敏感，敏感率在70%以上；未发现对亚胺培南、美罗培南耐药菌株；头孢西丁耐 药株对大多数抗菌药物的耐药率均较高，且与非耐药株的药敏结果进行比较两者之 间耐药性差异具有统计学意义（P0.05）。 2. 104株黏质沙雷菌中检出6株携带qnr基因和(或)aac(6?)-Ib-cr基因，其中3株携带qnr基 因；4株携带aac(6?)-Ib-cr基因(其中1株同时携带qnr基因)；未检测出qnrA、qnrC、qnrD 及qepA基因。9株检测出gy