金黄色葡萄球菌耐药性研究探究 进展安徽省立医院马筱玲资料文档.ppt

葡萄球菌耐药性研究进展及药敏试验的临床应用 安徽省立医院检验科 马筱玲 概 述 金黄色葡萄球菌在自然界广泛分布 金黄色葡萄球菌是医院感染重要的致病菌 对环境抵抗力强，容易产生耐药性 金葡菌主要耐药类型和耐药机制 耐青霉素金黄色葡萄球菌：产生β－内酰胺酶，水解青霉素中有效基团。 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：获得Mec基因，编码产生PBP2a，亲和力降低 耐万古霉素金黄色葡萄球菌：获得耐药基因，细胞壁增厚 对大环内酯类抗生素耐药：泵出机制，靶位改变 MRSA主要研究进展 MRSA临床实验室检测方法 SCC mec基因盒研究 社区获得性MRSA MRSA的耐药机制 在甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）中含有5种与β－内酰胺类抗生素亲和力高的青霉素结合蛋白(PBP)，总称为PBPs，具有羧肽酶或转肽酶作用，主要参与细胞壁粘肽层的合成。 使用β－内酰胺类抗生素时，药物可与PBPs结合，使其功能被抑制，使细胞壁合成受阻，导致细菌因不能抵抗外界的渗透压力而死亡。 MRSA的耐药机制 MSSA→mecA基因→MRSA mecA能编码合成一种新的青霉素结合蛋白2ａ(PBP2ａ) PBP2ａ能执行PBPs的生理功能，但与β－内酰胺类抗生素的亲和力低，当有β－内酰胺类抗生素存在时，正常的PBPs与之结合，功能被抑制，而PBP2ａ不与其结合，则可替代PBPs发挥作用，使细菌能够正常生长，产生耐药性。 mecA或PBP2a阴性的甲氧西林/苯唑西林耐药葡萄球菌是罕见的 MRSA检测方法 基因水平：mecA基因——PCR扩增法 蛋白水平：PBP2a蛋白——胶乳凝聚法 表型水平： 琼脂筛选法 苯唑西林纸片扩散法 头孢西丁纸片扩散法 稀释法 耐甲氧西林葡萄球菌的检测 4%NaCl- 6ug/ml苯唑西林盐平板筛选法 培养条件：35℃，24-48小时 结果：＞1个菌落生长，判定为甲氧西林耐药（MR）菌株 苯唑西林纸片法：1ug/片 金葡菌 11-12mm 凝固酶阴性葡萄球菌 ≤17mm 头孢西丁纸片：30ug/片 金葡菌、路邓 ≤21mm（2007CLSI) 凝固酶阴性葡萄球菌 ≤24mm 葡萄球菌属-2007 头孢西丁纸片扩散法： 修改了对金葡菌和路登葡萄球菌的“S”折点 缩短金葡菌的孵育时间到18小时 增加注释某些菌株可能甲氧西林耐药而头孢西丁敏感 检测葡萄球菌中mecA介导的耐药头孢西丁纸片法折点 头孢西丁纸片检测葡萄球菌中mecA介导的耐药的孵育* ?某些菌株的检测可能甲氧西林耐药和头孢西丁敏感… 为什么头孢西丁优于苯唑西林? 头孢西丁存在时mecA基因以更高水平表达 敏感性/特异性Tests for mecA-mediated Resistant S. aureus Sensitivity: OX MIC = OX DD = CX DD = PBP2a = mecA* 99% 98% 98% 100% Specificity: OX MIC = OX DD = CX DD = PBP2a = mecA 100% 99% 100% 100% Sensitivity/Specificity Tests for mecA-mediated Resistant CoNS Sensitivity: OX MIC = OX DD = CX DD = PBP2a = mecA* 99% 99% 98% 100% Specificity: OX MIC = OX DD CX DD = PBP2a mecA* 61% 67% 96% 94%** 头孢西丁检测MRS 头孢西丁 纸片法是.. 首选 用于检测 mecA介导的耐药 作为苯唑西林的 “替代物” (report oxacillin NOT cefoxitin) 对 S. lugdunensis 只用头孢西丁(不用 oxacillin disk) 金葡菌：与苯唑西林纸片扩散法相当 凝固酶阴性葡萄球菌：较苯唑西林纸片扩散法好 MRSA SCCmec基因盒研究 MRSA呈多重耐药 MRSA耐药特征及机制 PBP2a仅与β－内酰胺类抗生素亲和力降低，为何对其他非β－内酰胺类抗生素呈交叉耐药？ mecＡ基因的结构 mecＡ基因盒的J区有吸引和整合外来基因的功能， mecＡ基因与其整合的基因以基因复合体的形式存在，这个基因复合体叫做“葡萄球菌染色体mec基因盒”（staphylocossal cassette chromosome mec, SCCmec） SCCmec不是MRSA菌株