声带机械性创伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究-耳鼻咽喉科学专业论文.docx

声带机械性刨伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究 声带机械性刨伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究 中文摘要 2标本提取及保存 分别于各创伤手术后第7、14、30天在支撑喉镜下切取创伤声带膜部中后 2／3部分，经10％甲醛中固定，石蜡包埋，储存备用。 3组织学观察 3．1 HE染色： 各时相点动物创伤声带和对照组动物声带组织标本按常规病理 切片流程进行，每份标本矢状面切2张切片，冠状面于间隔的5处切片。}IE染 色，组织学观察。 3．2特殊复合染色法(苦味酸+阿尔辛蓝染色)显示胶原蛋白、弹力蛋白及黏 蛋白：取复合染色的组织切片观察，红色为胶原蛋白，紫色为弹力纤维。 4免疫组化法检测组织中PCNA、a-SMA、EGF、TGF一／3 l的表达 4 1试剂：①小鼠抗大鼠PCNA单克隆抗体：由美国SantaCruzBiotecchnologyInc 提供。②鼠抗人a—SMA单克隆抗体：由DAKO lnc提供。③兔抗鼠EGF单克 隆抗体：由武汉博士德生物工程有限公司提供。④兔抗鼠TGF—B 1多克隆抗体： 由美国Santa Cruz Biotecchnology Inc提供。 4 2免疫组化染色方法：按SABC法试剂盒和DAB显色试剂盒说明进行。 5图像分析 采用德国KONTRON IBAS 2 5全自动图像分析系统定量分析胶原纤维、弹 力纤维的密度(200倍显微镜下)及炎症和PCNA、a—SMA、EGF、TGF—p l 阳性细胞的记数(400倍显微镜下记每10814 1．t m2中的细胞数)。 6统计学处理 计量数据用均数±标准差表示(x±s)，使用SPSS 10 0forwindows软件进行 统计。 结果： 一、声带机械性创伤愈合机制的实验研究 (一)声带机械性创伤愈合的组织学观察及组织定量研究 1活体观察结果 正常对照组：声带呈珠白色，光滑，有光泽。 创伤组：创伤后第7天：声带高度充血、肿胀，暗红色。创伤后第14天： 声带机械性刨伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究 声带机械性刨伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究 中文摘要 声带仍充血、肿胀，但较1周前已有减轻，呈浅暗红色。创伤后第30天：声带 呈淡红色，表面光滑。 2组织学观察 (1)正常对照组 为复层鳞状上皮，表面可见嗜伊红染色的小齿轮状结构。 (2)刨伤组 创伤后第7天：炎症反应明显，上皮未完全修复。新生上皮较薄，细胞无层 次和极性；有肉芽组织形成；炎症细胞浸润以中性白细胞为主，肌层也见中性白 细胞浸润。l例合并化脓性感染。 刨伤后第14天：炎症反应减轻，创面已完全上皮化。新生上皮的细胞层数 普遍增加，基底细胞、旁基底细胞活跃增生，上皮层细胞极性和层次均较差。上 皮下肉芽组织相对成熟，内有少量淋巴细胞浸润。 创伤后第30天：修复的复层鳞状上皮细胞有了一定的极性和层次，但仍未 达正常。黏膜表面可见少量不规则的嗜伊红染色的小齿轮状结构。有的地方上皮 层下见瘢痕形成，肌层也见到少许瘢痕组织。 3炎症细胞分析 对照组仅固有层中有少量单核细胞和淋巴细胞。创伤后第7d的声带创面组 织中，有较多炎症细胞浸润，主要为中性粒细胞，在创伤后第14d，炎症细胞浸 润明显减少，以淋巴细胞为主；创伤后第30d，仅少量炎症细胞，为淋巴细胞。 4弹力纤维、胶原纤维观察及定量分析 (1)正常对照组 弹力纤维绝大部分呈横向分布与黏膜表面平行，排列整齐。上皮层下有一层 呈横向波浪状排列的胶原纤维，密度较疏(但有的部位该层缺失)。 (2)创伤组 创伤后第7天：弹力纤维大部分消失。胶原纤维量少，排列不规则。 创伤后14天：弹力纤维较第7天时有增加，在上皮基底细胞层下方出现一 层横向排列的弹力纤维。胶原纤维少，分布稀疏。 创伤后第30天：弹力纤维量较前有较大的增加，特别是基底细胞层下方出 现了排列有一定规律的弹力纤维，呈横向排列。局部见胶原纤维明显增多，排列 声带机械性刨伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究 声带机械性刨伤愈合机制及糖皮质激素干预的实验研究 中文摘要 紊乱，呈团块状或条索状分布。 (3)弹力纤维及胶原纤维定量分析 创伤后各时相点的弹力纤维面密度均少于对照组少(尸<o 01)。创伤后7和 14天的胶原纤维面密度小于对照组(P<o ol，0 05)，创伤后第30天多于对照组 和伤后第7天、14天。 (二)声带机械性创伤愈合过程中EGF的表达及其与上皮增殖活性的 关系 1 PCNA在上皮细胞的表达 (1)正常对照组：上皮的阳性表达仅位于基底细胞层。 (2)创伤组：创伤后第7天，上皮层表达PCNA较强；第14天表达达到 高峰；第30天表达减弱，但仍多于正常对照组。 2 EG冒的表达 (1)正常对照组：偶见血管内皮细胞表达EGF。 (2)刨伤组：创伤后第7天，在上皮及固有层浅、中层间质中